Интерферон альфа 2б хүний ​​рекомбинант заавар. Мансууруулах бодисын тухай бүх зүйл

Уг эмийг хүний ​​интерферон альфа-2b генийг суулгасан генетикийн аппаратанд Escherichia coli SG-20050/pIF16 омгийн бактерийн эсүүдээр нийлэгжүүлдэг. Уг эм нь 165 амин хүчил агуулсан уураг бөгөөд хүний ​​лейкоцитын альфа-2b интерферонтой ижил шинж чанар, шинж чанартай байдаг. Вирусын эсрэг үр нөлөө нь вирусын нөхөн үржихүйн явцад илэрдэг бөгөөд эмийг эсийн бодисын солилцооны үйл явцад идэвхтэй оруулдаг. Эсийн гадаргуу дээрх өвөрмөц рецепторуудтай урвалд орсноор эм нь эсийн доторх хэд хэдэн өөрчлөлтийг эхлүүлдэг бөгөөд үүнд тусгай фермент (уураг киназа ба 2-5-аденилат синтетаза) болон цитокин үйлдвэрлэх, тэдгээрийн үйл ажиллагаа нь рибонуклейн хүчлийн нийлэгжилтийг удаашруулдаг. эсийн доторх вирус болон вирусын уураг. Макрофагуудын фагоцитийн идэвхийг нэмэгдүүлж, зорилтот эсүүдэд лимфоцитын өвөрмөц цитотоксик нөлөөг сайжруулдаг. Функциональ үйл ажиллагааг өөрчилдөг дархлаа дарангуйлагдсан эсүүд, тогтоолт цитокины чанарын болон тоон найрлага, эсийн доторх уургийн үүсэх, шүүрэл. Хавдрын эсийн өсөлт, зарим онкоген үүсэхийг дарангуйлдаг бөгөөд энэ нь хавдрын өсөлтийг саатуулдаг.
Парентераль хэлбэрээр хэрэглэх үед эмийн хамгийн их концентраци 2-4 цагийн дараа хүрдэг. Хэрэглэснээс хойш 20-24 цагийн дараа цусны сийвэн дэх эмийг тогтоодоггүй. Цусны сийвэн дэх эмийн концентраци нь хэрэглэх давтамж, тунгаас шууд хамаардаг. Элгэнд метаболизмд орж, голчлон бөөрөөр ялгардаг, хэсэгчлэн өөрчлөгдөөгүй.

Үзүүлэлтүүд

Томуу, амьсгалын замын цочмог вируст халдварын эмчилгээ, урьдчилан сэргийлэх; хачигт энцефалитаас яаралтай урьдчилан сэргийлэх, хачгийн эсрэг иммуноглобулинтай хамт; атопик өвчин, харшлын риноконьюнктивит, гуурсан хоолойн багтраатусгай дархлаа эмчилгээний үед.
Насанд хүрэгчдэд зориулсан цогц эмчилгээ: цочмог вирүст гепатит В (шарлалтын тав дахь өдөр хүртэл цочмог үе ба дунд зэргийн хүнд хэлбэрүүд (сүүлийн үе шатанд эм нь үр дүн багатай байдаг; өвчний холестатик явц, элэгний кома үүсэх үед). , эм нь үр дүнгүй); цочмог удаан үргэлжилсэн гепатит В ба С, архаг идэвхтэй гепатит В ба С, дельта үүсгэгчтэй архаг гепатит В; үсэрхэг эсийн лейкеми, бөөрний хорт хавдар, IV үе шат, арьсны хорт хавдар (анхдагч тор, микоз мөөгөнцөр, ретикулосаркоматоз) ), суурь эсийн болон хавтгай эсийн бүдүүн гэдэсний хорт хавдар, Капошигийн саркома, сублейкемийн миелоз, кератоакантома, Лангерхансын эсээс гистиоцитоз архаг миелоид лейкеми, чухал тромбоцитеми; вируст коньюнктивит, кератит, кератоконьюнктивит, кератовит, кератоиридоциклит; шээс бэлгийн замын хламидийн халдвар; хачигт энцефалитийн халууралт ба менингеаль хэлбэр.
1-ээс доош насны хүүхдэд цогц эмчилгээ: цагаан мөгөөрсөн хоолойн амьсгалын замын папилломатоз, папилломыг арилгасны дараа дараагийн өдрөөс эхлэн; индукцийн хими эмчилгээ дууссаны дараа ремиссия дахь цочмог лимфобластик лейкеми (4-5 сарын ремиссия).

Хүний рекомбинант альфа-2b интерфероныг хэрэглэх арга, тун

Интерферон альфа-2b хүний ​​рекомбинантыг булчинд, арьсан дор, гэмтсэн хэсэгт, нүдний салст бүрхэвчээр, амаар авч, гаднаас нь хэрэглэнэ. Хэрэглэх арга, тун, эмчилгээний горим, үргэлжлэх хугацааг заалт, нас, өвчтөний нөхцөл байдал, эмийн хүлцэл зэргээс хамааран дангаар нь тогтооно.
Эмчилгээний явцад цусны ерөнхий эмнэлзүйн шинжилгээг 2 долоо хоног тутамд, биохимийн шинжилгээг 4 долоо хоног тутамд хийнэ. Нейтрофилийн үнэмлэхүй тоо 0.50 X 10 ^ 9 / л-ээс бага, тромбоцитын тоо 25 X 10 ^ 9 / л-ээс бага байвал эмчилгээг зогсоох хэрэгтэй. Нейтрофилийн үнэмлэхүй тоо 0.75 X 10 ^ 9 / л-ээс бага, ялтасны тоо 50 X 10 ^ 9 / л-ээс бага байвал эмийн тунг түр хугацаагаар 2 дахин бууруулж, давтан хийхийг зөвлөж байна. 1-2 долоо хоногийн дараа шинжилгээ хийх; Хэрэв өөрчлөлтүүд хэвээр байвал эмчилгээг цуцлахыг зөвлөж байна.
Элэгний үйл ажиллагааг зөрчсөн шинж тэмдэг илэрвэл өвчтөнийг сайтар хянаж байх ёстой. Шинж тэмдэг илрэх үед эмийг хэрэглэхээ зогсоох хэрэгтэй.
Хэт мэдрэмтгий байдлын урвал (ангионевротик хаван, чонон хөрвөс, анафилакс, бронхоспазм) үүссэн тохиолдолд эмийг цуцалж, зохих эмийн эмчилгээг нэн даруй тогтооно.
Үүнийг сайтар хянаж байх шаардлагатай функциональ байдалбага зэргийн болон дунд зэргийн бөөрний дутагдал байгаа тохиолдолд бөөр.
Бэлдмэлийг удаан хугацаагаар хэрэглэснээр уушгины хатгалгаа, уушигны үрэвсэл үүсэх боломжтой. Уушигны синдромыг арилгах нь эмийг цаг тухайд нь татан буулгах, глюкокортикостероидыг томилох замаар хөнгөвчилдөг.
Хэрэв төв мэдрэлийн систем эсвэл сэтгэцийн өөрчлөлт, түүний дотор сэтгэлийн хямралд орсон бол эмчилгээний явцад болон эмчилгээ дууссанаас хойш зургаан сарын дотор сэтгэцийн эмчийн хяналтанд байх шаардлагатай. Эмчилгээг зогсоосны дараа эдгээр эмгэгүүд ихэвчлэн хурдан сэргээгддэг боловч заримдаа бүрэн урвуу хөгжилд 3 долоо хоног зарцуулдаг. Бусад хүмүүст чиглэсэн түрэмгий зан авир, амиа хорлох бодол илэрвэл сэтгэцийн эмгэгийн шинж тэмдгүүд улам дордож, буурахгүй байвал сэтгэцийн эмчтэй зөвлөлдөж, эмийг зогсоохыг зөвлөж байна. Амиа хорлох бодол, оролдлого нь насанд хүрэгчдийнхээс илүү хүүхэд, өсвөр насныханд илүү түгээмэл байдаг. Хэрэв сэтгэцийн ноцтой эмгэгтэй (түүх орно) насанд хүрсэн өвчтөнд эмийг хэрэглэх шаардлагатай гэж үзвэл сэтгэцийн эмгэгийг эмчилж, зохих үзлэг шинжилгээнд хамрагдсан тохиолдолд л эмчилгээг эхлүүлнэ. Сэтгэцийн ноцтой эмгэг (түүхийг оруулаад) 18-аас доош насны өвчтөнд эмийг хэрэглэх нь эсрэг заалттай байдаг.
Эмгэг судлалтай өвчтөнүүдэд Бамбай булчирхайЭмчилгээг эхлэхээс өмнө бамбай булчирхайг өдөөдөг дааврын түвшинг тодорхойлох шаардлагатай бөгөөд ирээдүйд түүний агууламжийг 6 сарын дотор дор хаяж 1 удаа, мөн бамбай булчирхайн үйл ажиллагааны сулралын шинж тэмдэг илэрвэл хянах шаардлагатай. Ийм өвчтөнд эмийг хэрэглэх нь эндокринологчийн хяналтан дор явагдах ёстой. Бамбай булчирхайн үйл ажиллагаа алдагдах эсвэл эмчлэх боломжгүй байгаа өвчний явц муудаж байгаа тохиолдолд эмийг цуцлах шаардлагатай.
Бэлдмэлийг удаан хугацаагаар хэрэглэснээр харааны эрхтнүүдийн үйл ажиллагааг зөрчих боломжтой. Үүнийг хийхийг зөвлөж байна нүдний үзлэгэмчилгээг эхлэхээс өмнө. Алсын хараатай холбоотой аливаа гомдлын хувьд нүдний эмчтэй яаралтай зөвлөлдөх шаардлагатай. Нүдний торлог бүрхэвч өөрчлөгдөх боломжтой өвчтэй өвчтөнүүд (артерийн гипертензи, чихрийн шижин болон бусад) дор хаяж зургаан сард нэг удаа нүдний эмчийн үзлэгт хамрагдах ёстой. Харааны эмгэгийг хүндрүүлэх, илрэх үед эмчилгээг цуцлах талаар бодох шаардлагатай.
Өвчин дэвшилттэй өвчтөнүүд онкологийн өвчинэсвэл / ба зүрх судасны тогтолцооны эмгэг, электрокардиограммыг сайтар хянах, хянах шаардлагатай. Артерийн гипотензи үүсэх үед зохих эмчилгээ, хангалттай чийгшлийг хангана.
Мансууруулах бодисыг өндөр тунгаар хэрэглэдэг өндөр настай өвчтөнүүдэд ухаан алдах, ухаан алдах, энцефалопати, таталт үүсэх боломжтой. Эдгээр эмгэгүүд үүсч, тунг бууруулах үр дүнгүй тул эмчилгээг цуцална.
Бэлдмэлийг удаан хугацаагаар хэрэглэснээр зарим өвчтөнд интерферонтой эсрэгбие үүсч болно. Ихэвчлэн эсрэгбиеийн титр бага байдаг тул гадаад төрх нь эмчилгээний үр нөлөөг бууруулдаггүй.
Шилжүүлэн суулгах өвчтөнд интерферон нь дархлааны системийг идэвхжүүлдэг тул эмнэлгийн дархлаа дарангуйлах нь үр дүн багатай байж болно.
Өвдөлттэй өвчтөнүүдэд болгоомжтой хэрэглээрэй аутоиммун өвчин. Аутоиммун өвчний шинж тэмдэг илэрснээр нарийн шинжилгээ хийж, интерферонтой эмчилгээг үргэлжлүүлэх боломжийг үнэлэх шаардлагатай. Заримдаа эмийг эмчлэх нь псориаз, саркоидозын хурцадмал байдал эсвэл илрэхтэй холбоотой байдаг.
Эмчилгээний явцад болзошгүй үйл ажиллагаа явуулахдаа болгоомжтой байх хэрэгтэй аюултай төрөл зүйлАнхаарал, сэтгэлзүйн урвалын хурдыг нэмэгдүүлэх шаардлагатай үйл ажиллагаа (тээврийн хэрэгсэл жолоодох гэх мэт), ядрах, нойрмоглох, чиг баримжаа алдагдах эсвэл бусад сөрөг урвал үүсэх тохиолдолд ийм үйл ажиллагаанаас татгалзах шаардлагатай.

Хэрэглэхийн эсрэг заалтууд

Хэт мэдрэмтгий байдал, зүрх судасны тогтолцооны хүнд өвчин (сүүлийн үеийн миокардийн шигдээс, декомпенсацийн үе шатанд зүрхний дутагдал, хүнд хэлбэрийн эмгэг зүрхний хэмнэл), хүнд хэлбэрийн харшлын өвчин, элэг ба/эсвэл бөөрний хүнд хэлбэрийн дутагдал, аутоиммун гепатит, элэгний хатууралтай архаг гепатит, хүүхэд, өсвөр үеийнхний сэтгэцийн эмгэг, эмгэг, эпилепси болон төв мэдрэлийн тогтолцооны бусад эмгэгүүд, аутоиммун өвчний түүх, эм хэрэглэх. шилжүүлэн суулгасны дараа дархлаа дарангуйлах эм, уламжлалт эмчилгээний аргаар хянах боломжгүй бамбай булчирхайн эмгэг; жирэмслэлт, хөхүүл үе, хамтрагч нь жирэмсэн эрэгтэйчүүдэд хэрэглэнэ.

Хэрэглээний хязгаарлалт

Хүнд хэлбэрийн миелосупресс, элэг ба / эсвэл бөөрний дутагдал, бамбай булчирхайн өвчин, псориаз, саркоидоз, уушигны архаг бөглөрөлт өвчин, чихрийн шижин, кетоацидозын хандлага, цусны бүлэгнэлтийн эмгэг, сэтгэцийн эмгэг, ялангуяа сэтгэлийн хямрал, амиа хорлох бодол, оролдлогын түүх зэргээр илэрхийлэгддэг.

Жирэмсэн болон хөхүүл үед хэрэглэнэ

Жирэмсэн болон хөхүүл үед эмийг хэрэглэх нь эсрэг заалттай байдаг.

Хүний рекомбинант альфа-2b интерфероны гаж нөлөө

Зүрх судасны систем ба цус:түр зуурын эргэлтийн кардиомиопати, хэм алдагдал, артерийн гипотензи, миокардийн шигдээс, лейкопени, лимфопени, тромбоцитопени, цус багадалт.
Хоол боловсруулах систем:хуурай ам, хэвлийгээр өвдөх, дотор муухайрах, диспепси, турах, хоолны дуршил буурах, гүйлгэх, бөөлжих, нойр булчирхайн үрэвсэл, элэгний хордлого, аланин аминотрансфераза, шүлтлэг фосфатазын идэвхжил нэмэгдэх.
Мэдрэлийн систем ба мэдрэхүйн эрхтнүүд:цочромтгой байдал, сэтгэл гутрал, хараа, нүдний мэдрэлийн үрэвсэл, торлог бүрхэвчийн цус алдалт, торлог бүрхэвчийн артери ба венийн тромбоз, папиледема.
Арьс бүрхэвч:хөлрөх, тууралт, загатнах, үс унах, орон нутгийн үрэвслийн урвал ихсэх.
Дотоод шүүрлийн систем:бамбай булчирхайн өөрчлөлт, чихрийн шижин.
Яс-булчингийн систем:рабдомиолиз, нурууны өвдөлт, хөлний базлалт, миозит, миалги.
Амьсгалын систем:фарингит, амьсгал давчдах, ханиалгах, уушигны үрэвсэл.
Шээсний систем:бөөрний дутагдал, креатинин, мочевины концентраци нэмэгдсэн.
Дархлааны систем:аутоиммун эмгэг (ревматоид артрит, васкулит, чонон ярын хам шинж), саркоидоз, анафилакс, харшилтай ангиоэдема, нүүрний хаван.
Бусад:томуу төст хам шинж (халуурах, жихүүдэс хүрэх, астения, ядрах, ядрах, артралги, миалги, толгой өвдөх).

Хүний рекомбинант альфа-2b интерферон бусад бодисуудтай харилцан үйлчлэх

Энэ эм нь клиренсийг бууруулж, цусны сийвэн дэх аминофиллиний концентрацийг 2 дахин нэмэгдүүлдэг.
Амфотерицин В-тэй хамт хэрэглэхэд бөөрний гэмтэл, гипотензи, бронхоспазм үүсэх эрсдэл нэмэгддэг; бусульфантай - элэгний венийн бөглөрөлт өвчин; дакарбазинтай - элэгний хоруу чанар; зидовудинтай хамт - нейтропени.
Энэ эм нь доксорубицины хоруу чанарыг нэмэгдүүлдэг.
Левотироксин натритай хослуулан хэрэглэхэд үр нөлөө нь өөрчлөгддөг тул тунг тохируулах шаардлагатай байж болно.
Пегаспаргазтай хамт хэрэглэхэд гаж нөлөөний эрсдэл харилцан нэмэгддэг.
Мансууруулах бодис нь цитохром Р-450 изоферментийн идэвхийг бууруулж, улмаар фенитоин, циметидин, химес, диазепам, варфарин, теофиллин, пропранолол, зарим цитостатик бодисын солилцоонд нөлөөлдөг.
Өмнө нь эсвэл хамт хэрэглэж байсан эмийн миелотоксик, нейротоксик, кардиотоксик нөлөөг сайжруулж болно.
Төв мэдрэлийн системийг дарангуйлдаг эмүүд, дархлаа дарангуйлах эмүүд (глюкокортикостероидуудыг оруулаад) нэгэн зэрэг хэрэглэхээс зайлсхий.
Эмчилгээний явцад архи уухыг зөвлөдөггүй.
Гидроксиуреатай хавсарч хэрэглэвэл арьсны васкулитын давтамж нэмэгдэж болно.
Теофиллинтэй хамт хэрэглэх үед цусны сийвэн дэх теофиллиний концентрацийг хянах, шаардлагатай бол тунг тохируулах шаардлагатай.

Хэт их уух

Мансууруулах бодис хэтрүүлэн хэрэглэснээр гаж нөлөө нэмэгддэг. Эмийг цуцлах, шинж тэмдгийн болон дэмжих эмчилгээ хийх шаардлагатай.

Хүний рекомбинант альфа-2b интерферон идэвхтэй бодис агуулсан эмийн худалдааны нэр

Хамтарсан эмүүд:
Интерферон альфа-2b хүний ​​рекомбинант + Димедрол: Офтальмоферон®.

Интерфероны бэлдмэлийн найрлага нь тэдгээрийн ялгарах хэлбэрээс хамаарна.

Гаргах маягт

Интерфероны бэлдмэлүүд нь дараахь хэлбэрээр ялгардаг.

• нүд, хамрын дусал, тарилгын уусмал бэлтгэх зориулалттай лиофилижүүлсэн нунтаг;
• тарилгын уусмал;
• нүдний дусал;
• нүдний хальс;
• хамрын дусал ба шүрших;
• тос;
• арьсны гель;
• липосом;
• шүрших сав;
• аман уусмал;
• шулуун гэдэсний лаа;
• үтрээний лаа;
• суулгац;
• микрокластерууд;
• шахмал (шахмал хэлбэрээр интерфероныг Entalferon брэндийн дор үйлдвэрлэдэг).

фармакологийн нөлөө

IFN-ийн бэлдмэлүүд нь вирусын эсрэг ба дархлалыг зохицуулах эмийн бүлэгт багтдаг.

Бүх IFN нь вирусын эсрэг болон хавдрын эсрэг үйлчилгээтэй байдаг. Тэдний үйлдлийг өдөөх чадвар нь адил чухал юм. макрофагууд - эхлэлд чухал үүрэг гүйцэтгэдэг эсүүд.

IFN нь бие махбодид нэвтрэн орох эсэргүүцлийг нэмэгдүүлэхэд хувь нэмэр оруулдаг вирусууд ба нөхөн үржихүйг блоклох вирусууд тэд эс рүү ороход. Сүүлийнх нь IFN-ийг дарах чадвартай холбоотой юм вирусын элч (элч) РНХ-ийн орчуулга .

Үүний зэрэгцээ IFN-ийн вирусын эсрэг нөлөө нь тодорхой эсрэг чиглээгүй болно вирусууд , өөрөөр хэлбэл, IFN нь вирусын өвөрмөц шинж чанараар тодорхойлогддоггүй. Энэ нь тэдний олон талт байдал, вирусын эсрэг өргөн хүрээний үйл ажиллагааг тайлбарладаг.

Интерферон - энэ юу вэ?

Интерферонууд нь ижил төстэй шинж чанартай анги юм гликопротейнууд , сээр нуруутан амьтдын эсүүд вирусын болон вирусын бус шинж чанартай янз бүрийн өдөөгч хүчин зүйлийн нөлөөнд хариу үйлдэл үзүүлэхэд үүсдэг.

Википедиагийн дагуу биологийн хувьд идэвхтэй бодисЭнэ нь интерферон шинж чанартай, уургийн шинж чанартай байх ёстой вирусын эсрэг үйл ажиллагаа төрөл бүрийн холбоотой вирусууд , наад зах нь гомолог (ижил төстэй) эсүүдэд "эсийн бодисын солилцооны үйл явц, түүний дотор РНХ ба уургийн нийлэгжилтээр зуучилдаг".

ДЭМБ болон Интерфероны хорооноос санал болгож буй IFN-ийн ангилал нь тэдгээрийн эсрэгтөрөгч, физик, хими, биологийн шинж чанаруудын ялгаан дээр суурилдаг. Үүнээс гадна тэдгээрийн төрөл зүйл, эсийн гарал үүслийг харгалзан үздэг.

Антиген чанар (антигенийн өвөрмөц чанар) дагуу IFN нь ихэвчлэн хүчилд тэсвэртэй, хүчилд тэсвэртэй гэж хуваагддаг. Альфа ба бета интерферонууд (I төрлийн IFN гэж нэрлэдэг) хүчилд тэсвэртэй байдаг. Интерферон гамма (γ-IFN) нь хүчилд тэсвэртэй байдаг.

α-IFN үйлдвэрлэдэг захын цусны лейкоцитууд (В ба Т төрлийн лейкоцитууд), тиймээс үүнийг өмнө нь тэмдэглэсэн лейкоцитын интерферон . Одоогийн байдлаар түүний хамгийн багадаа 14 сорт байдаг.

β-IFN үүсдэг фибробластууд , тиймээс үүнийг бас нэрлэдэг фибробласт .

Хуучин тэмдэглэгээ γ-IFN - дархлааны интерферон , гэхдээ энэ нь өдөөгдсөн Т хэлбэрийн лимфоцитууд , NK эсүүд (хэвийн (байгалийн) алуурчид; англи хэлнээс "байгалийн алуурчин") ба (магадгүй) макрофагууд .

IFN-ийн үндсэн шинж чанар, үйл ажиллагааны механизм

Үл хамаарах зүйлгүйгээр бүх IFN нь зорилтот эсийн эсрэг олон үйлдэлт үйл ажиллагаагаараа тодорхойлогддог. Тэдний хамгийн нийтлэг шинж чанар нь тэднийг өдөөх чадвар юм вирусын эсрэг байдал .

Интерфероныг эмчилгээний зориулалтаар ашигладаг урьдчилан сэргийлэхянз бүрийн үед вируст халдварууд . IFN бэлдмэлийн нэг онцлог нь давтан тарилга хийснээр үр нөлөө нь сулардаг.

IFN-ийн үйл ажиллагааны механизм нь дарангуйлах чадвартай холбоотой юм вируст халдварууд . Өвчтөний биеийн эргэн тойронд интерферон эмийн эмчилгээний үр дүнд халдварын голомт хүртэл тэсвэртэйгээс нэг төрлийн хаалт үүсдэг вирус халдваргүй эсүүд нь халдварын цаашдын тархалтаас сэргийлдэг.

Бүрэн бүтэн (бүрэн бүтэн) эсүүдтэй харьцах нь хэрэгжилтээс сэргийлдэг нөхөн үржихүйн мөчлөгвирусууд зарим эсийн ферментийг идэвхжүүлснээр ( уургийн киназууд ).

Интерфероны хамгийн чухал үүрэг бол дарангуйлах чадвар юм гематопоэз ; биеийн дархлааны хариу урвал, үрэвслийн хариу урвалыг зохицуулах; эсийн үржих, ялгах үйл явцыг зохицуулах; өсөлтийг саатуулж, нөхөн үржихээс сэргийлнэ вирусын эсүүд ; гадаргуугийн илэрхийлэлийг өдөөдөг эсрэгтөрөгч ; бие даасан функцийг дарах B ба T хэлбэрийн лейкоцитууд үйл ажиллагааг идэвхжүүлэх NK эсүүд гэх мэт..

Биотехнологид IFN-ийн хэрэглээ

Синтез, өндөр гүйцэтгэлтэй цэвэршүүлэх аргуудыг боловсруулах лейкоцит ба рекомбинант интерферонууд эм үйлдвэрлэхэд хангалттай хэмжээгээр IFN-ийн бэлдмэлийг оношлогдсон өвчтөнүүдийн эмчилгээнд хэрэглэх боломжийг нээж өгсөн. вируст гепатит .

Рекомбинант IFN-ийн нэг онцлог шинж чанар нь хүний ​​биеэс гадуур үүсдэг.

Жишээлбэл, рекомбинант интерферонбета-1а (IFN β-1a) хөхтөн амьтдын эсээс (ялангуяа Хятадын шишүүхэй өндгөвчний эсээс) олж авсан бөгөөд шинж чанараараа ижил төстэй байдаг интерферон бета-1b (IFN β-1b) Enterobacteriaceae гэр бүлийн гишүүнээс үйлдвэрлэсэн коли (Escherichia савханцрын).

Интерфероныг өдөөдөг эмүүд - энэ юу вэ?

IFN-ийн өдөөгч нь өөрөө интерферон агуулаагүй эм, гэхдээ үүний зэрэгцээ түүний үйлдвэрлэлийг өдөөдөг.

Фармакодинамик ба фармакокинетик

α-IFN-ийн гол биологийн нөлөө нь вирусын уургийн синтезийг дарангуйлах . Эсийн вирусын эсрэг төлөв байдал нь эмийг хэрэглэснээс хойш хэдхэн цагийн дотор эсвэл бие махбодид IFN-ийн үйлдвэрлэлийг өдөөдөг.

Гэсэн хэдий ч IFN нь нөлөөлөхгүй эрт үе шатууд хуулбарлах мөчлөг, өөрөөр хэлбэл шингээлтийн үе шатанд нэвтрэн орох вирус эс рүү (нэвтрэх) болон дотоод бүрэлдэхүүн хэсгийг суллах вирус түүнийг тайлах явцад.

Вирусны эсрэг үйлдэл α-IFN нь эсийн халдварын үед ч илэрдэг халдварт РНХ . IFN нь эсэд ордоггүй, зөвхөн тодорхой рецепторуудтай харилцан үйлчилдэг эсийн мембранууд (gangliosides эсвэл агуулсан ижил төстэй бүтэц олисугар ).

IFN alpha-ийн үйл ажиллагааны механизм нь хувь хүний ​​үйлдэлтэй төстэй юм гликопептидийн гормонууд . Энэ нь үйл ажиллагааг идэвхжүүлдэг генүүд , тэдгээрийн зарим нь бүтээгдэхүүн үүсэхийг кодлоход шууд оролцдог вирусын эсрэг үйлдэл .

β интерферонууд бас байна вирусын эсрэг үйлдэл , энэ нь нэгэн зэрэг үйл ажиллагааны хэд хэдэн механизмтай холбоотой байдаг. Бета интерферон NO-синтетазыг идэвхжүүлдэг бөгөөд энэ нь эсийн доторх азотын ислийн концентрацийг нэмэгдүүлдэг. Сүүлийнх нь нөхөн үржихүйн үйл ажиллагааг таслан зогсооход гол үүрэг гүйцэтгэдэг вирусууд .

β-IFN нь хоёрдогчийг идэвхжүүлдэг. эффектор функцууд байгалийн алуурчидin , В төрлийн лимфоцитууд , цусны моноцитууд , эдийн макрофагууд (мононуклеар фагоцитууд) ба нейтрофил , эдгээр нь эсрэгбиеээс хамааралтай ба эсрэгбиеээс хамааралгүй эсийн хоруу чанараар тодорхойлогддог.

Үүнээс гадна β-IFN нь дотоод бүрэлдэхүүн хэсгийн ялгаралтыг блоклодог вирус мөн метилжилтийн процессыг тасалдуулж байна вирусын РНХ .

γ-IFN нь дархлааны хариу урвалыг зохицуулахад оролцож, хүндийн зэргийг зохицуулдаг үрэвслийн урвал. Хэдийгээр тэр өөрийн гэсэн байдаг вирусын эсрэг болон хавдрын эсрэг нөлөө , гамма интерферон маш сул. Үүний зэрэгцээ α- ба β-IFN-ийн идэвхийг ихээхэн нэмэгдүүлдэг.

Парентераль тарьсны дараа хамгийн их концентраци IFN-ийг 3-12 цагийн дараа тэмдэглэнэ.Биологийн хүртээмжийн индекс нь 100% (арьсан дор тарьсны дараа болон булчинд тарьсны дараа хоёулаа).

T½-ийн хагас задралын хугацаа 2-7 цаг байна. Цусны сийвэн дэх IFN-ийн ул мөрийн концентрацийг 16-24 цагийн дараа илрүүлдэггүй.

Хэрэглэх заалт

IFN нь эмчлэхэд зориулагдсан вируст өвчин тэр цохилт амьсгалын замын .

Үүнээс гадна интерфероны бэлдмэлийг өвчтөнд зааж өгдөг архаг хэлбэрүүд гепатит, Дельта .

Эмчилгээний зориулалтаар вируст өвчин ба ялангуяа IFN-α-г голчлон хэрэглэдэг (хоёулаа IFN-alpha 2b ба IFN-alpha 2a). Эмчилгээний "алтан стандарт" гепатит С альфа-2б ба альфа-2а пегилжүүлсэн интерферонууд гэж үздэг. Тэдэнтэй харьцуулахад ердийн интерферонууд үр дүн багатай байдаг.

IFN lambda-3-ийг кодлох үүрэгтэй IL28B генд тэмдэглэсэн генетикийн полиморфизм нь эмчилгээний үр нөлөөнд ихээхэн ялгаатай байдаг.

1-р генотиптэй өвчтөнүүд гепатит С Энэ генийн нийтлэг аллельтай бол бусад өвчтөнүүдтэй харьцуулахад эмчилгээний урт, илүү тод үр дүнд хүрэх магадлал өндөр байдаг.

IFN-ийг ихэвчлэн өвчтэй өвчтөнүүдэд өгдөг онкологийн өвчин : хорт хавдар , нойр булчирхайн дотоод шүүрлийн хавдар , Ходкины бус лимфома , карциноид хавдар ; Капошигийн саркома , улмаас ; үсэрхэг эсийн лейкеми ,олон миелома , бөөрний хорт хавдар гэх мэт..

Эсрэг заалтууд

Интерфероныг хэт мэдрэмтгий өвчтөнүүд, түүнчлэн ийм өвчтэй хүүхэд, өсвөр насныханд зааж өгдөггүй. хүнд сэтгэцийн эмгэг болон мэдрэлийн системийн эмгэг Амиа хорлох, амиа хорлох оролдлого дагалддаг, хүнд, удаан үргэлжилдэг.

-тай хослуулан вирусын эсрэг эмРибавирин IFN нь хүнд хэлбэрийн дутагдалтай гэж оношлогдсон өвчтөнүүдэд эсрэг заалттай байдаг бөөр (CC 50 мл / мин-ээс бага байх нөхцөл).

Интерферон бэлдмэлүүд нь эсрэг заалттай байдаг (зохих эмчилгээ нь хүлээгдэж буй эмнэлзүйн үр нөлөөг өгөхгүй тохиолдолд).

Сөрөг нөлөө

Интерферон нь үүсгэж болох эмийн ангилалд багтдаг олон тооныянз бүрийн систем, эрхтнүүдийн сөрөг урвал. Ихэнх тохиолдолд эдгээр нь интерфероныг / in, s / c эсвэл / m-д нэвтрүүлсний үр дүн боловч эмийн бусад эмийн хэлбэрүүд нь тэдгээрийг өдөөж болно.

IFN хэрэглэхэд хамгийн түгээмэл тохиолддог гаж нөлөө нь:

• хоолны дуршилгүй болох;
• дотор муухайрах;
• жихүүдэс хүрэх;
• биед чичрэх.

Бөөлжих, ихсэх, ам хуурайших, үс унах (), астения ; өвөрмөц бус шинж тэмдгүүдтэй төстэй ханиадны шинж тэмдэг ; нурууны өвдөлт, сэтгэл гутралын төлөв байдал , булчингийн булчингийн өвдөлт , амиа хорлох, амиа хорлохыг оролдох тухай бодол, ерөнхий сулрал, амт, төвлөрөл буурах, цочромтгой байдал, нойрны эмгэг (ихэнхдээ), артерийн гипотензи , төөрөгдөл.

Ховор хүмүүст сөрөг нөлөөҮүнд: хэвлийн дээд хэсэгт баруун талд өвдөх, биед тууралт гарах (улаан толбо, толбо), мэдрэлийн мэдрэмж ихсэх, тарилгын талбайд өвдөх, хүчтэй үрэвсэх, хоёрдогч вирусын халдвар (халдвар орно энгийн герпес вирус ), арьсны хуурайшилт ихсэх, , нүдэнд өвдөх , коньюнктивит бүдэг хараа, үйл ажиллагааны алдагдал лакримал булчирхай , сэтгэлийн түгшүүр, сэтгэлийн тогтворгүй байдал; сэтгэцийн эмгэг , үүнд түрэмгийлэл нэмэгдэх гэх мэт; гипертерми , диспепсийн шинж тэмдэг , амьсгалын замын эмгэг, турах, сул сандал, гипер эсвэл гипотиреодизм , сонсголын бэрхшээл (бүрэн алдах хүртэл), уушгинд нэвчдэс үүсэх, хоолны дуршил нэмэгдэх, бохь цус алдах, мөчрүүд, амьсгал давчдах , бөөрний үйл ажиллагааны алдагдал болон бөөрний дутагдлын хөгжил , захын ишеми , гиперурикеми , мэдрэлийн эмгэг гэх мэт..

IFN эмээр эмчлэх нь шалтгаан болдог нөхөн үржихүйн үйл ажиллагааны алдагдал . Приматуудад хийсэн судалгаагаар интерферон байдаг эмэгтэйчүүдийн сарын тэмдгийн мөчлөгийг алдагдуулдаг . Үүнээс гадна IFN-α-ийн эмчилгээ хийлгэж буй эмэгтэйчүүдэд түвшин ба in.

Энэ шалтгааны улмаас интерфероныг томилохдоо нөхөн үржихүйн насны эмэгтэйчүүд хэрэглэх ёстой жирэмслэлтээс хамгаалах бэлдмэл . Нөхөн үржихүйн насны эрчүүдэд болзошгүй гаж нөлөөний талаар мэдэгдэхийг зөвлөж байна.

Ховор тохиолдолд интерферонтой эмчилгээ нь нүдний эмгэгийг дагалдаж болно. торлог бүрхэвч дэх цус алдалт , ретинопати (үүнд, гэхдээ үүгээр хязгаарлагдахгүй толбоны хаван ), нүдний торлог бүрхэвч дэх фокусын өөрчлөлт, харааны хурц байдал буурах ба / эсвэл харааны талбайн хязгаарлагдмал байдал; дискний хаван оптик мэдрэл , нүдний (хоёр дахь гавлын) мэдрэлийн мэдрэлийн үрэвсэл , артерийн бөглөрөл эсвэл торлог бүрхэвчийн судлууд .

Заримдаа интерфероныг ууж байх үед үүсч болно гипергликеми , нефротик синдромын шинж тэмдэг , . өвчтэй өвчтөнүүдэд чихрийн шижин муудаж магадгүй эмнэлзүйн зурагөвчин.

байхыг үгүйсгэхгүй тархины судасны цус алдалт , олон хэлбэрийн эритема , эд эсийн үхжил тарилгын талбайд зүрх ба тархины судасны ишеми , гипертриглицеридерми , саркоидоз (эсвэл түүний явцыг улам хурцатгах), Лайеллийн синдромууд болон Стивенс-Жонсон .

Интерфероныг дангаар нь эсвэл хослуулан хэрэглэх Рибавирин ховор тохиолдолд энэ нь үүсгэж болно апластик цус багадалт (AA) эсвэл бүр PAKKM ( улаан ясны чөмөгний бүрэн аплази ).

Интерфероны бэлдмэлтэй эмчилгээ хийлгэж байх үед өвчтөнд янз бүрийн өвчин үүсэх тохиолдол бас байсан аутоиммун болон дархлалын тогтолцооны эмгэгүүд (үүнд Верлхофын өвчин болон Московицын өвчин ).

Интерферон, хэрэглэх заавар (арга ба тун)

Альфа, бета, гамма интерфероныг хэрэглэх заавар нь өвчтөнд эм өгөхөөс өмнө түүнд хэр мэдрэмтгий болохыг тодорхойлохыг зөвлөж байна. өвчин үүсгэсэн.

Хүний лейкоцитын интерфероныг хэрэглэх аргыг өвчтөнд тавьсан оношлогооноос хамааран тодорхойлно. Ихэнх тохиолдолд үүнийг дараах байдлаар өгдөг арьсан доорх тарилга, гэхдээ зарим тохиолдолд эмийг булчин эсвэл судсаар тарьж хэрэглэхийг зөвшөөрдөг.

Эмчилгээний тун, эмчилгээний тун, эмчилгээний үргэлжлэх хугацааг эмнэлзүйн нөхцөл байдал, өвчтөний биеийн түүнд заасан эмчилгээнд үзүүлэх хариу урвалаас хамааран тодорхойлно.

"Хүүхдийн" интерферон гэдэг нь лаа, дусал, тос хэлбэрээр эм гэсэн үг юм.

Хүүхдэд зориулсан интерферон хэрэглэх заавар нь энэ эмийг эмчилгээний болон урьдчилан сэргийлэх бодис болгон ашиглахыг зөвлөж байна. Нярай болон ахимаг насны хүүхдэд зориулсан тунг эмчлэгч эмч сонгоно.

Урьдчилан сэргийлэх зорилгоор INF-ийг уусмал хэлбэрээр ашигладаг бөгөөд үүнийг бэлтгэхийн тулд өрөөний температурт нэрмэл эсвэл буцалсан ус хэрэглэдэг. Бэлэн болсон уусмал нь улаан өнгөтэй, цайвар өнгөтэй байна. Энэ нь хүйтэнд 24-48 цагаас илүүгүй хугацаагаар хадгалагдах ёстой. Мансууруулах бодисыг хүүхэд, насанд хүрэгчдийн хамар руу оруулдаг.

At нүдний вируст өвчин эмийг нүдний дусал хэлбэрээр тогтоодог.

Өвчний шинж тэмдгүүдийн хүндрэл багасмагц дуслын хэмжээг нэг дусал болгон бууруулна. Эмчилгээний хугацаа 7-10 хоног байна.

-аас үүдэлтэй гэмтэлийг эмчлэхэд зориулагдсан герпес вирусууд , тосыг өдөрт 2 удаа арьс, салст бүрхэвчийн нөлөөлөлд өртсөн хэсэгт нимгэн давхаргаар түрхэж, 12 цагийн зайтай байлгана. Эмчилгээний хугацаа 3-аас 5 хоног байна (гэмтсэн арьс, салст бүрхэвчийн бүрэн бүтэн байдлыг бүрэн сэргээх хүртэл).

Урьдчилан сэргийлэх зорилгоор ORZ мөн тослох ёстой хамрын хэсгүүд . Хичээлийн 1 ба 3 дахь долоо хоногт процедурын давтамж өдөрт 2 удаа байна. 2 дахь долоо хоногт завсарлага авахыг зөвлөж байна. Урьдчилан сэргийлэх зорилгоор интерфероныг бүх хугацаанд хэрэглэнэ амьсгалын замын өвчний тархалт .

Ихэнхдээ өвчтэй хүүхдүүдэд нөхөн сэргээх курс үргэлжлэх хугацаа амьсгалын замын вируст ба бактерийн халдварын давтамж , ENT эрхтнүүд , давтан халдвар -аас үүдэлтэй энгийн герпес вирус , хоёр сар байна.

Ампулыг хэрхэн үржүүлэх, интерфероныг хэрхэн яаж хэрэглэх вэ?

Ампулыг интерферон хэрэглэх заавар нь ампулыг хэрэглэхийн өмнө ампулыг онгойлгож, тасалгааны температурт 2 мл-ийн ампул дахь тэмдэглэгээ хүртэл усаар (нэрмэл эсвэл чанасан) хийнэ.

Агуулга нь бүрэн уусах хүртэл зөөлөн сэгсэрнэ. Уусмалыг тус бүрт нь тарьдаг хамрын суваг өдөрт хоёр удаа, таван дусал дуслаар, тарилгын хооронд дор хаяж зургаан цагийн зайтай.

Эмчилгээний зорилгоор IFN нь эхний үед эхэлдэг ханиадны шинж тэмдэг . Эмийн үр нөлөө өндөр байх тусам өвчтөн үүнийг хурдан ууж эхэлдэг.

Хамгийн үр дүнтэй нь амьсгалах арга юм (хамар эсвэл амаар). Нэг амьсгалахад 10 мл усанд ууссан эмийн гурван ампулын агуулгыг авахыг зөвлөж байна.

Усыг +37 ° C-аас ихгүй температурт урьдчилан халаана. Амьсгалах процедурыг өдөрт хоёр удаа хийдэг бөгөөд тэдгээрийн хооронд дор хаяж нэгээс хоёр цагийн зайтай байдаг.

Шүрших, дусаах үед ампулын агуулгыг хоёр миллилитр усанд уусгаж, хамрын суваг бүрт 0.25 мл (эсвэл таван дусал) өдөрт гурваас зургаан удаа тарина. Эмчилгээний хугацаа 2-3 хоног байна.

Урьдчилан сэргийлэх зорилгоор хүүхдэд зориулсан хамрын дуслыг өдөрт 2 удаа (5 дусал) дусааж, өвчний хөгжлийн эхний үе шатанд дуслын давтамж нэмэгддэг: эмийг өдөрт дор хаяж 5-6 удаа хэрэглэнэ. эсвэл хоёр цаг.

Олон хүмүүс интерфероны уусмалыг нүд рүү дуслах боломжтой эсэхийг сонирхож байна. Энэ асуултын хариулт нь эерэг байна.

Хэт их уух

Интерфероныг хэтрүүлэн хэрэглэх тохиолдлыг тайлбарлаагүй болно.

Харилцаа холбоо

β-IFN нь нийцдэг кортикостероидын эмүүд болон ACTH. Эмчилгээний явцад авч болохгүй миелоз дарангуйлагч эм , зэрэг цитостатикууд (энэ нь үүсгэж болзошгүй нэмэлт нөлөө ).

Болгоомжтой, IFN-β-ийг клиренс нь ихээхэн хамаардаг эмүүдтэй хамт тогтооно цитохром P450 системүүд (эпилепсийн эсрэг эмүүд , зарим антидепрессантууд гэх мэт).

IFN-альфа болон эмийг бүү уу Телбивудин . α-IFN-ийг нэгэн зэрэг хэрэглэх нь харилцан үйлчлэлийг сайжруулахад хүргэдэг. -тай хамт хэрэглэхэд фосфазид харилцан нэмэгдүүлэх боломжтой миелотоксик чанар хоёулаа эм (хэмжээний өөрчлөлтийг сайтар хянахыг зөвлөж байна гранулоцитууд болон;

IFN-ийг эмчилгээнд бас ашигладаг бөгөөд түүний зорилго нь байнга өвддөг өвчтөнүүдийг нөхөн сэргээх явдал юм. амьсгалын замын халдварууд хүүхдүүд.

Ихэнх хамгийн сайн сонголтХүүхдэд зориулсан хүлээн авалт - хамар дахь дусал: энэ хэрэглээнд интерферон нь ходоод гэдэсний замд нэвчдэггүй (хамрын эмийг шингэлэхээс өмнө усыг 37 хэм хүртэл халаах хэрэгтэй).

Нярайн хувьд интерфероныг лаа хэлбэрээр (150 мянган IU) зааж өгдөг. Хүүхдэд зориулсан лаа нь өдөрт 2 удаа нэг нэгээр нь тарилгын хооронд 12 цагийн зайтай байх ёстой. Эмчилгээний курс 5 хоног байна. Хүүхдийг бүрэн эмчлэхийн тулд SARS Дүрмээр бол нэг курс хангалттай.

Эмчилгээний хувьд өдөрт 2 удаа 0.5 г тосыг авна. Эмчилгээ дунджаар 2 долоо хоног үргэлжилнэ. Дараагийн 2-4 долоо хоногт тосыг долоо хоногт 3 удаа хэрэглэнэ.

Олон тооны эерэг сэтгэгдэлМансууруулах бодисын тухай өгүүлснээр энэ тунгийн хэлбэр нь өөрийгөө үр дүнтэй эмчилгээ болгон батлав стоматит болон үрэвссэн гуйлсэн булчирхайд . Хүүхдэд зориулсан интерферонтой амьсгалах нь үр дүнтэй байдаг.

Мананцар үүсгэгчийг хэрэглэхэд эмийг хэрэглэх үр нөлөө мэдэгдэхүйц нэмэгддэг (энэ нь 5 микроноос их диаметртэй тоосонцорыг шүрших төхөөрөмжийг ашиглах шаардлагатай). Мананцар үүсгэгчээр амьсгалах нь өөрийн гэсэн онцлогтой байдаг.

Нэгдүгээрт, интерфероныг хамараар амьсгалах ёстой. Хоёрдугаарт, төхөөрөмжийг ашиглахаасаа өмнө түүний доторх халаалтын функцийг унтраах шаардлагатай (IFN нь уураг бөгөөд 37 хэмээс дээш температурт устдаг).

Мананцар үүсгэгчээр амьсгалахын тулд нэг ампулын агуулгыг 2-3 мл нэрмэл эсвэл шингэлнэ. эрдэст ус(энэ зорилгоор давсны уусмалыг бас ашиглаж болно). Үр дүн нь нэг процедурт хангалттай. Өдрийн турш процедурын давтамж 2-оос 4 хүртэл байна.

Хүүхдэд интерфероныг удаан хугацаагаар эмчлэхийг зөвлөдөггүй, учир нь донтолт үүсч, хүлээгдэж буй үр дүн гарахгүй гэдгийг санах нь зүйтэй.

Жирэмсэн үед интерферон

Ирээдүйн эхэд үзүүлэх эмчилгээний үр дүн нь сөрөг хариу урвалын эрсдэлээс давсан тохиолдолд үл хамаарах зүйл байж болно хортой нөлөөургийн хөгжилд.

Рекомбинант IFN-ийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг хөхний сүүгээр тусгаарлах боломжийг үгүйсгэхгүй. Сүүгээр дамжин урагт өртөх боломжийг үгүйсгэх аргагүй тул хөхүүл эмэгтэйчүүдэд IFN-ийг тогтоодоггүй.

Онцгой тохиолдолд, IFN-ийг томилохоос зайлсхийх боломжгүй тохиолдолд эмэгтэй хүн эмчилгээний явцад хөхөөр хооллохоос татгалзахыг зөвлөж байна. Мансууруулах бодисын гаж нөлөөг багасгахын тулд (томууны шинж тэмдэг илрэх) IFN-тэй хамт хэрэглэхийг зөвлөж байна. .

Шинэ бүтээл нь генийн инженерчлэл, биотехнологи, анагаах ухаан, фармакологи зэрэгтэй холбоотой. Хүний лейкоцитын интерферон альфа-2b-ийн нийлэгжилтийг кодлодог шинэ рекомбинант олон хуулбар плазмид ДНХ pSX50 бөгөөд түүний илэрхийлэл нь лактоз ба триптофан дэмжигч, транскрипцийн төгсгөлийн хяналтан дор байдаг. Хүлээн авагчийн омгийн E. coli BL21-ийн эсийг рекомбинант плазмид ДНХ pSX50-тай хувиргасны үр дүнд 0.9-10 хүртэлх бүтээмжтэй хүний ​​рекомбинант лейкоцитын интерферон альфа-2b үйлдвэрлэгч E. coli SX50 омгийг олж авсан. 1 литр өсгөвөрлөх орчинд г интерферон альфа-2б. Рекомбинант альфа-2b интерфероныг олж авах арга нь үүсгэсэн рекомбинант E. coli SX50 омгийг ашиглахад суурилдаг бөгөөд биосинтезийн явцад шим тэжээлийн субстратуудыг тасралтгүй нэмж, триптофаны агууламж багатай тэжээллэг орчинд гүн тариалах, тэдгээрийг механик устгахад оршино. үед бичил биетний эсүүд өндөр даралт, нэгтгэсэн уургийг гуанидин гидрохлоридын төвлөрсөн уусмалд уусгаж, дараа нь интерфероныг физиологийн буферийн уусмалд эмх замбараагүй бодис агуулсан орчинд нөхөн сэргээж, Chelating Sepharose Fastlow төрлийн давирхайн дээр интерфероныг гурван үе шаттай хроматографийн аргаар цэвэршүүлнэ. Cu +2 ионоор хөдөлгөөнгүй болгож, CM төрлийн Sephsrose Fast Flow ион солилцооны давирхай дээр ион солилцооны хроматографи, Superdex 75 давирхайн гель шүүлтүүрийн хроматографи.Энэ арга нь электрофорезын дагуу 99% -иас дээш цэвэршилттэй интерферон бодисыг авах боломжийг олгодог. RF HPLC ба пироген агуулаагүй (LAL-тест) 1 литр өсгөвөрлөгч орчинд дор хаяж 400-800 мг хэмжээтэй гельийг мөнгөөр ​​будаж, 98% -иас их хэмжээгээр будах үед багасгах ба бууруулахгүй нөхцөл. 3 n. мөн 3 z.p f-ly, 6 өвчтэй.

RF-ийн патентын зураг 2242516

Шинэ бүтээл нь генийн инженерчлэлтэй холбоотой эм, биотехнологийн аргаар олж авсан, тухайлбал хүний ​​рекомбинант лейкоцит интерферон альфа-2b-ийг эмнэлгийн зориулалтаар үйлдвэрлэлийн аргаар (цаашид интерферон гэх), түүнчлэн гэдэсний савханцар (E. coli) үүсгэдэг рекомбинант омгууд болон плазмидын ДНХ кодчилолд зориулагдсан. интерфероны синтез.

Интерферонууд нь вирусийн халдвар эсвэл бусад эмгэг төрүүлэгчдийн хариуд эсээс ялгарч, ялгардаг 15,000-аас 21,000 дальтоны молекул жинтэй уургийн молекулууд юм. Альфа, бета, гамма гэсэн гурван үндсэн бүлэг интерферонууд байдаг. Эдгээр бүлгүүд нь дангаараа нэг төрлийн биш бөгөөд интерфероны хэд хэдэн өөр молекул сортуудыг агуулж болно. Тиймээс интерферон альфагийн 14 гаруй генетик сортыг олж илрүүлсэн бөгөөд эдгээр нь сонирхолтой бөгөөд олддог. өргөн хэрэглээАнагаах ухаанд вирусын эсрэг, пролифератив, дархлааг сайжруулах бодис болгон ашигладаг.

Вирус болон бусад өдөөгч бодисоор өдөөгдсөн хүний ​​лейкоцитын хүний ​​лейкоцитын интерфероныг үйлдвэрлэх алдартай аргууд (SU1713591, RU 2066188, RU 2080873).

Интерферон үйлдвэрлэх эдгээр аргын гол сул тал нь гепатит В, С вирус, дархлал хомсдолын вирус гэх мэт хүний ​​вирусээр эцсийн бүтээгдэхүүнээр бохирдох магадлал юм.

Одоогийн байдлаар интерфероныг микробиологийн синтезээр олж авах арга нь илүү ирээдүйтэй гэж хүлээн зөвшөөрөгдсөн бөгөөд энэ нь харьцангуй хямд түүхий эдээс илүү өндөр гарцтай зорилтот бүтээгдэхүүнийг авах боломжийг олгодог. Энэ тохиолдолд ашигласан аргууд нь нянгийн экспрессэд оновчтой бүтцийн генийн хувилбарууд, түүнчлэн түүний илэрхийлэлийг хянадаг зохицуулалтын элементүүдийг бий болгох боломжийг олгодог.

Анхны бичил биетний хувьд Pichia pastoris, Pseudomonas putida, Escherichia coli омгийн янз бүрийн загварыг ашигладаг.

P. pastoris-ийг интерферон үйлдвэрлэгч болгон ашиглах сул тал (J.N. Garcia, J.A. Aguiar нар. //Pichia pastoris дахь хүний ​​IFN-2b-ийн өндөр түвшний илэрхийлэл.//Biotecnologia Aplicada, 12(3),152-155, 1995 ), энэ төрлийн мөөгөнцрийг исгэх маш хэцүү нөхцөл бөгөөд биосинтезийн явцад индуктор, ялангуяа метанолын концентрацийг хатуу хадгалах шаардлагатай байдаг. Ps-ийн омгийг ашиглах сул тал. putida (SU1364343, SU1640996, SU1591484, RU1616143, RU2142508) нь экспрессийн бага түвшинд (1 литр өсгөвөрт 10 мг интерферон) исгэх үйл явцын нарийн төвөгтэй байдал юм. Илүү үр дүнтэй нь Escherichia coli-ийн омгийг ашиглах явдал юм (Semin. Oncol., 1997, 6-р сар; 24 (3 Suppl. 9): S9-41-S9-51).

Олон тооны плазмид ба интерфероныг илэрхийлдэг E. coli омгууд мэдэгдэж байна: E. coli омгууд нь Z-pBR322 (Psti) HclF-11-206 эсвэл Z-pBR 322(Pstl)/HclN SN35 плазмидтай ATCC 31633 ба 31644 AHL6 (SU 1764515), E. coli омог pINF-AP2 (SU 1312961), E. coli омог pINF-F-Pa (AU 1312962), E. coli омог SG 20050 p280/21FN плазмидтай (Kravchenko et al.Vganor. chemistry, 1987, v. 13, No 9, p. 1186-1193), pINF14 плазмидтай E. coli SG 20050 омог (SU 1703691), pINF16 плазмидтай E. coli SG 20050 омог (RU0454 гэх мэт). Эдгээр омгийг ашиглах технологийн сул тал нь тэдний тогтворгүй байдал, түүнчлэн интерфероны илэрхийлэл хангалтгүй түвшин юм.

Ашигласан омгийн шинж чанараас гадна процессын үр ашиг нь интерфероныг тусгаарлах, цэвэрлэхэд ашигладаг технологиос ихээхэн хамаардаг.

Ps эсийг тариалахыг багтаасан интерферон үйлдвэрлэх алдартай арга. putida, биомасс устгах, полиэтиленэймин эмчилгээ, аммонийн сульфатын фракци, фенилсилохром С-80 дээр гидрофоб хроматографи, лизатын рН-ийн фракци, түүний концентраци ба диафилтраци, DE-52 целлюлоз дээр ион солилцох хроматографи, хромат градиентийн рН-экс солих, Үүний үр дүнд CM целлюлоз -52 дээр ялгаруулж, шүүлтүүрийн кассетаар дамжуулж концентраци болон Sephadex G-100 (SU 1640996) дээр гель шүүнэ. Энэ аргын сул тал нь нарийн төвөгтэй олон үе шаттай исгэхээс гадна эцсийн бүтээгдэхүүнийг олж авах олон үе шаттай үйл явц юм.

Мөн интерферон үйлдвэрлэх арга байдаг бөгөөд үүнд E. coli SG 20050/pIF16 омгийг LB шөлөнд термостаттай сэгсрэгчээр колбонд ургуулж, биомассыг центрифуж, буферийн уусмалаар угааж, эсийг устгахын тулд дууны туяа хийх арга байдаг. Үүссэн лизатыг центрифугдэж, буферт 3 М мочевинаар угааж, буферт гуанидин хлорид уусгаж, дуу авианы аргаар, центрифуг хийж, исэлдэлтийн сульфитолиз, 8 М мочевин эсрэг диализ, нөхөн сэргээлт хийж, CM-52-ийн Semasulexcell дээр эцсийн хоёр үе шаттай хроматографи хийнэ. -50 (RU 2054041). Энэ аргын сул тал нь тусгаарлах, цэвэршүүлэх үйл явцын үндсэн үе шатуудын харьцангуй бага бүтээмж юм. Ялангуяа энэ нь бүтээгдэхүүний хэт авианы боловсруулалт, диализ, исэлдэлтийн сульфитолиз зэрэгт хамаатай бөгөөд энэ нь интерфероны гарцын тогтворгүй байдал, түүнчлэн интерфероны үйлдвэрлэлийн үйлдвэрлэлд энэ аргыг ашиглах боломжгүй юм.

Хамгийн ойрын аналог (прототип) болгон хүний ​​лейкоцитын интерфероныг олж авах аргыг зааж өгч болно, энэ нь рекомбинант E. coli омгийг тариалах, үүссэн биомассыг -70 ° C-аас ихгүй температурт хөлдөөх, гэсгээх, бичил биетний эсийг устгах. лизоцим, ДНХ-ийн лизат руу оруулах замаар ДНХ, РНХ-ийг зайлуулж, тусгаарлагдсан уусдаггүй интерферон хэлбэрийг угаалгын нунтаг бүхий буферын уусмалаар угааж, интерфероны тунадасыг гуанидин гидрохлоридын уусмалд уусгаж, нөхөн сэргээх, нэг үе шаттайгаар цэвэршүүлэх. - солилцооны хроматограф. Үйлдвэрлэгчийн хувьд P lac, P t7, P trp гэсэн гурван дэмжигчийг агуулсан рекомбинант pSS5 плазмидыг ашиглан олж авсан E. coli SS5 омог, нуклеотидын орлуулалт бүхий альфа-интерферон генийг ашигладаг.

Энэхүү плазмидыг агуулсан E. coli SS5 омгийн интерфероны илэрхийлэл нь P lac, P t7, P trp гэсэн гурван дэмжигчээр хянагддаг. Интерфероны экспрессийн түвшин нь эсийн суспензийн 1 литр тутамд 800 мг орчим байдаг (RU 2165455).

Энэ аргын сул тал нь бичил биетний эс, ДНХ, РНХ-ийн ферментийн устгал, интерфероныг хроматографийн нэг үе шаттайгаар цэвэршүүлэхэд ашиглах чадвар багатай байдаг. Энэ нь интерферон тусгаарлах үйл явцын тогтворгүй байдлыг үүсгэж, чанар нь буурч, интерфероныг үйлдвэрлэлийн үйлдвэрлэлд дээрх схемийг ашиглах боломжийг хязгаарладаг. Энэхүү плазмидын сул тал ба түүн дээр үндэслэсэн омгийн сул тал нь E. coli BL21 (DE3) омгийн хүчтэй зохицуулалтгүй T7 фагийн дэмжигчийг плазмид хэрэглэх бөгөөд T7 РНХ полимеразын ген нь лак опероны промоторын дор байдаг бөгөөд үргэлж "урсдаг". Үүний үр дүнд интерфероны синтез нь эсэд тасралтгүй явагддаг бөгөөд энэ нь плазмидын задрал, омгийн эсийн амьдрах чадвар буурч, улмаар интерфероны гарц буурахад хүргэдэг.

Энэхүү шинэ бүтээлийн зорилго нь интерфероны биосинтезийн өндөр түвшин бүхий шинэ рекомбинант плазмидын ДНХ-ийг ашиглан E. coli үйлдвэрлэгчийн рекомбинант үйлдвэрлэлийн омгийг бүтээх, мөн чанарын хувьд тохирсон интерферон бодисыг эмнэлгийн зориулалтаар авах үйлдвэрлэлийн үр дүнтэй технологийг боловсруулах явдал юм. Интерферон альфа-2b бодисыг "Европын фармакопей"-д оруулна.

Энэ асуудлыг Холбооны улсын нэгдсэн үйлдвэрийн ГосНИИ Генетикийн бүх Оросын үйлдвэрлэлийн омгийн цуглуулгад хадгалагдсан, VKPM V-8550 дугаартай, recombinant плазмид ДНХ pSX50 ба Escherichia coli SX50 омог үүсгэснээр шийдэгдсэн.

түүнчлэн рекомбинант E. coli SX50 омгийг ашиглах, биосинтезийн явцад шим тэжээлийн субстратыг тасралтгүй нэмж, механик устгалын явцад триптофаны агууламж багатай шим тэжээлт тэжээлт орчинд гүн өсгөвөрлөх замаар рекомбинант альфа-2b интерфероныг гарган авах арга. бичил биетний эсийг өндөр даралтын дор, нэгтгэсэн уургийг гуанидин гидрохлоридын төвлөрсөн уусмалд уусгасны дараа интерфероныг физиологийн буфер уусмалд эмх замбараагүй байдлын нөлөөгөөр нөхөн сэргээж, интерфероныг Chelating Sepharose Falow зэрэг давирхайн дээр гурван үе шаттай хроматографийн аргаар цэвэршүүлнэ. Cu +2 ионоор хөдөлгөөнгүй болгож, CM Sepharose Fast Flow зэрэг ион солилцооны давирхайн дээр ион солилцох хроматограф, Superdex 75 зэрэг давирхайн гель шүүлтүүрийн хроматограф.

Шинэ бүтээлийн дагуу хүний ​​лейкоцитын интерферон альфа-2b-ийн нийлэгжилтийг кодлодог шинэ рекомбинант олон хуулбар плазмид ДНХ pSX50-ийг санал болгож байна, түүний илэрхийлэл нь лактоз ба триптофан дэмжигч, транскрипцийн төгсгөлийн хяналтан дор байдаг. Плазмид pSX50 нь 3218 суурь хос (bp) бөгөөд дараах хэсгүүдтэй байдгаараа онцлог юм.

1 нуклеотидээс 176 нуклеотид (n) хүртэлх дараалалд триптофан дэмжигч (P trp) агуулсан 176 bp ДНХ-ийн фрагмент орно;

МЭ 177 оноос хойшхи дараалал МЭ 194 он хүртэл орчуулгын эхлэлийг хариуцдаг Shine Delgarno дарааллыг агуулсан 18 bp-ийн синтетик ДНХ-ийн фрагментийг агуулдаг;

МЭ 195 оны дараалал МЭ 695 он гэхэд Дараах нуклеотидын орлуулалт бүхий интерфероны генийн дарааллыг агуулсан 501 bp ДНХ-ийн фрагмент багтана: 37-р байрлалд А-ыг С-ээр, 39-р байрлалд G-ийг Т-ээр, 40-р байрлалд А-ыг С-ээр сольсон; мөн байрлалд 42, G-г T-ээр сольсон, 67-р байрлалд A-ыг C, 69-р байрлалд G-т, 70-р байрлалд А-аас С, 72-р байрлалд A-т, 96-р байрлалд G-д өөрчлөгдөнө. 100-ыг A-аас C руу, 102-р байрлалд A-ыг T, 114-р байрлалыг А-ыг C, 120-ыг C-г, 126-ыг G-ийг A, 129-ийг G-ийг A, 330-ыг өөрчлөх C-г G-д өөрчлөх, 339-р байрлалд G-ийг А болгож, 342-р байрлалд G-ийг А-д, 487-р байрлалд А-ыг С-д, 489-р байрлалыг А-ыг T болгож, 495-р байрлалыг G-ийг А болгож өөрчлөх;

МЭ 696 оноос хойшхи дараалал МЭ 713 он гэхэд синтетик полилинкер агуулсан 18 bp-ийн синтетик ДНХ-ийн фрагмент орно;

МЭ 714 оны дараалал МЭ 1138 он хүртэл 4129 b.p-тэй pKK223-3 плазмидын ДНХ-ийн фрагмент багтана. МЭ 4553 он хүртэл 425 bp хэмжээтэй, хатуу транскрипцийн төгсгөлийн дарааллыг агуулсан rrnBT 1 T 2;

МЭ 1139 оны дараалал МЭ 1229 он хүртэл 2487 b.p-ээс pUC19 плазмидын ДНХ-ийн фрагмент багтана. МЭ 2577 он хүртэл хэмжээ 91 p. O., β-лактомазын генийн дэмжигчийг агуулсан (ампициллиний эсэргүүцлийн ген - Amp R);

МЭ 1230 оноос хойшхи дараалал 2045 он хүртэл. 720 b.p-тэй pUC4K плазмидын ДНХ-ийн фрагмент багтана. МЭ 1535 он хүртэл 816 bp хэмжээтэй, кан генийн бүтцийн бүсийг агуулсан;

МЭ 2046 оноос хойшхи дараалал МЭ 3218 он хүртэл 1625-аас 453 b.p хүртэл pUC19 плазмидын ДНХ-ийн фрагмент багтана. хэмжээ 1173 BP, плазмид (ори) ба лак промотор (P lac) -ийн хуулбарыг хариуцдаг дарааллыг агуулсан.

Зураг 1-5-д pSX50 плазмидын барилгын схем болон физикийн зургийг харуулав.

Зураг 6-д pSX50 плазмидын хувьд тогтоосон нуклеотидын бүрэн дарааллыг харуулав.

Уламжлалт генетикийн инженерийн технологийг ашиглан Escherichia coli BL21 эсийг pSX50 плазмидаар хувиргаснаар Escherichia coli SX50 омгийг гаргаж авсан. E.Coli SX50 омог нь дараах шинж чанаруудаар тодорхойлогддог.

Соёлын болон морфологийн онцлог

Эсүүд нь жижиг, шулуун, өтгөрүүлсэн саваа хэлбэртэй, грам сөрөг, споргүй. Энгийн тэжээллэг орчинд эсүүд сайн ургадаг. Дифко агар дээр ургах үед дугуй, гөлгөр, гүдгэр, үүлэрхэг, гялалзсан, саарал өнгийн колони үүсдэг, гөлгөр ирмэгтэй. Шингэн орчинд ургах үед (глюкоз бүхий хамгийн бага орчинд эсвэл LB-шөл) тэд хүчтэй жигд манан үүсгэдэг.

Физик-биологийн онцлог

Аэроб. Өсөлтийн температурын хүрээ нь 6.5-7.5-ийн оновчтой рН-д 4-42 ° C байна.

Азотын эх үүсвэр болох эрдэс давс нь аммонийн болон нитрат хэлбэрийн аль аль нь, мөн органик нэгдлүүдамин хүчил, пептон, триптон, мөөгөнцрийн ханд гэх мэт.

Амин хүчил, глицерин, нүүрс усыг нүүрстөрөгчийн эх үүсвэр болгон ашигладаг. Антибиотик эсэргүүцэл. Эсүүд канамициныг эсэргүүцэх чадвартай (100 мкг / мл хүртэл).

Escherichia coli 8X50 омог нь интерферон үйлдвэрлэгч юм.

Омог хадгалах орчны арга, нөхцөл, найрлага

Тосон дор 20 мкг/мл концентрацитай канамицин нэмсэн L-arape-д, 15% глицерин агуулсан L-шөл, тохирох антибиотикийг ампулыг хасах 70 хэмийн температурт, лиофильжсэн төлөвт ампулыг 1000 градусын температурт хийнэ. нэмэх 4 хэмийн температур.

Escherichia coli SX50 омгийг Bergi's Key (1974) судалгаагаар Escherichia coli төрлийн омог гэж тодорхойлсон.

Альфа-2b интерфероныг үйлдвэрлэлийн аргаар үйлдвэрлэх арга

Санал болгож буй аргын нэг онцлог нь интерфероныг исгэх явцад хуримтлагддаг уусдаггүй хэлбэрээс тусгаарлах боломжийг олгодог технологийг боловсруулах явдал бөгөөд энэ нь тусгаарлах үйл явцын технологийн схемийг ихээхэн хялбарчилж, зорилтот бүтээгдэхүүний гарцыг нэмэгдүүлэх боломжтой юм.

Энэ арга нь биосинтезийн явцад шим тэжээлийн субстрат, болж өгвөл глюкоз, мөөгөнцрийн хандыг тогтмол нэмж, триптофаны агууламжийг бууруулж, 700 хэмийн өндөр даралтаар бичил биетний эсийг механик устгах замаар шим тэжээлийн орчинд Escherichia coli SX50 омгийг тариалахаас бүрдэнэ. -900 бар, интерфероныг буферийн гуанидины гидрохлоридын уусмалд уусгаж, интерфероныг эмх замбараагүй бодисуудын оролцоотойгоор физиологийн буферийн уусмалд нөхөн төлжүүлж, дараа нь 3 үе шаттай хроматографийн аргаар интерфероныг Chelating Sepharose Fast Flow + 2-ээр хөдөлгөөнгүй болгосон давирхайн дээр цэвэрлэнэ. ионууд, CM Sepharose Fast Flow зэрэг ион солилцооны давирхайн ион солилцооны хроматограф, Superdex 75 зэрэг давирхайн гель шүүлтүүрийн хроматограф.

Интерфероныг олж авах бие даасан үе шатуудыг хэрэгжүүлэх оновчтой нөхцөл нь дараах байдалтай байна.

Исгэх нь процессын туршид субстратын тасралтгүй нэмэлтээр явагддаг бөгөөд энэ нь интерфероны экспрессийн өндөр түвшинд хүргэдэг;

Эсийг устгах ажлыг 900 бар даралтаар Гаулин төрлийн задалдаг төхөөрөмжөөр гүйцэтгэдэг;

Уусдаг эсийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг (ДНХ, РНХ, уураг, липополисахарид гэх мэт) зайлуулах нь интерфероны уусдаггүй хэлбэрийг угаалгын нунтаг (Triton XI00, мочевин гэх мэт) агуулсан буфер уусмалаар угаах замаар хийгддэг;

Интерферон агуулсан үүссэн тунадасыг 6 М гуанидин гидрохлоридын буфер уусмалд уусгана;

Интерфероны нөхөн төлжилтийг хаотроп бодис агуулсан физиологийн буферийн уусмалаар хийдэг;

Интерфероны гурван үе шаттай хроматографийн цэвэршүүлэлтийг Cu +2 ионоор хөдөлгөөнгүй болгосон Chelating Sepharose Fast Flow дээр, катион солилцооны давирхай CM Sepharose Fast Flow дээр, Superdex 75 төрлийн давирхай дээр гель шүүх хроматографи;

Хроматографийн цэвэршилт бүрийн дараа ариутгах шүүлтүүрийг 0.22 мкм нүхний хэмжээтэй пирогенгүй шүүлтүүрээр гүйцэтгэдэг.

Тайлбарласан аргыг хэрэглэсний үр дүнд интерфероны гаралт нь ойролцоогоор 400-800 мг интерферон бөгөөд 1 литр өсгөвөрлөгчтэй байдаг. Үүссэн бүтээгдэхүүний чанар нь альфа-2b интерферон бодисын талаархи "Европын фармакопея" стандарт, шаардлагад нийцдэг.

Санал болгож буй арга ба прототипийн хоорондох мэдэгдэхүйц ялгаа нь:

Биосинтезийн явцад 1 литр өсгөвөрлөгчөөс илүү их хэмжээний интерферон авах боломжтой өндөр бүтээмжтэй омгийн загварыг ашиглах;

эсийн биомассыг үр дүнтэй механик устгах аргыг ашиглах нь интерфероны уусдаггүй хэлбэрийн илүү цэвэр хандыг богино хугацаанд, бага алдагдалтай авах боломжтой болгодог;

Эмх замбараагүй бодисууд байгаа тохиолдолд нөхөн сэргээх явцад физиологийн буферийн уусмалыг ашиглах нь интерфероны зөв нөхөн үржихүйн хэлбэрийн гарцыг нэмэгдүүлэх боломжийг олгодог;

Интерфероныг гурван үе шаттай хроматографийн аргаар цэвэршүүлэх нь гельийг мөнгөөр ​​будсан, RF HPLC-ийн дагуу 98% -иас дээш, бараг агуулаагүй нөхцөлд электрофорезын дагуу 99% -иас илүү цэвэршилттэй интерферон бодисыг бууруулах, бууруулахгүй байх боломжийг олгодог. пироген (LAL тест).

Нэхэмжлэгдсэн бүлгийн шинэ бүтээлийн мөн чанар, давуу талыг дараах жишээн дээр харуулав.

Жишээ 1 pSX50 рекомбинант плазмидын бүтээц

pSX50 плазмидыг бүтээх арга нь дараах алхмуудыг агуулна.

pSX10 вектор плазмидын бүтэц;

1. pSX3 плазмидын бүтэц (2641 bp)

2. вектор плазмидын бүтэц pSX10 (2553 bp)

pSX41 рекомбинант плазмидыг барих (3218 bp);

pSX43 рекомбинант плазмидыг барих (3218 bp);

pSX45 рекомбинант плазмидыг барих (3218 bp);

pSX50 (3218 bp) рекомбинант плазмидын бүтээн байгуулалт.

pSX10 вектор плазмидын бүтэц

pSX10 вектор плазмид нь pUC19 вектор бөгөөд ампициллиний эсэргүүцлийн бета-лактамаза генийн кодлогч дараалал нь кан генийн кодчилолын дараалалаар солигдох ба pKK223-3 плазмидын транскрипцын төгсгөлийг агуулдаг.

pSS10 векторын плазмидыг бүтээх ажлыг хоёр үе шаттайгаар явуулдаг.

Ампер генийн кодлох бүсийг кан генийн кодлох бүсээр солих pUC19 плазмидыг төлөөлдөг pSX3 (2641 p. O.) плазмидыг олж авах;

BamHI сайтын ард ggBT 1 T 2 транскрипцийн терминаторыг кодлодог ДНХ-ийн фрагментийг оруулсан pSX3 плазмидын вектор плазмид pSX10 (2553 bp) авах.

pSX3 плазмидыг авахын тулд ПГУ-аар (полимеразын гинжин урвал) ДНХ-ийн олшруулалтын таван үеийг зарцуулна. Эхний шатанд pUC19 плазмидын ДНХ-ийг загвар болгон ашиглан 1828 bp-ийн ДНХ-ийн фрагментийг олшруулах ажлыг гүйцэтгэдэг. (PU1-PU2 фрагмент) праймер ашиглан:

Энэ болон дараагийн ПГУ-ын урвалыг дараах нөхцөлд явуулна: 20 мМ Tis-HCl, рН 8.8, 10 мМ (NH 4) 2 SO 4, 10 мМ KCl, 2 tM MgCl 2, 0.1% Triton X100, 0.1 мг/мл. BSA, dNTP бүрийн 0.2 мМ, 1.25 u Pfu ДНХ полимераз, 100 нг ДНХ. Олшруулах үйл явц нь дараах үе шатуудаас бүрдэнэ: 95 ° C-т 5 минут халаах, 35 ПГУ-ын цикл (30 сек 95 ° C, 30 сек 56 ° C, 2 мин 72 ° C), 72 ° C-д 10 минутын турш өсгөвөрлөх. Олшруулсны дараа (мөн дараагийн олшруулалтын дараа) ДНХ-ийн фрагментийг 1% агароз гель дээр электрофорезээр цэвэршүүлнэ. Хоёр ба гурав дахь шатанд pUC4K плазмидын ДНХ-ийг загвар болгон ашиглан 555 bp ДНХ-ийн фрагментийг олшруулах ажлыг гүйцэтгэдэг. (Фрагмент KM1-KM2) праймер ашиглан:

ба 258 bp ДНХ-ийн фрагментийг олшруулах. (KMZ-KM4) праймертай

ПГУ-ын тав дахь шатанд фрагментуудыг (PU1-PU2) болон (KM1-KM4) дараах нөхцлөөр нэгтгэнэ: 95°С-т 5 минутын турш халаана, 5 ПГУ-ын цикл (30 сек 95°С, 30 сек 56°) C, 10 мин 72 ° C) ба 72 ° C-д 10 минутын турш өсгөвөрлөнө. Сүүлчийн ПГУ-ын дараа олж авсан ДНХ нь E. coli DH5 эс болон хувирч, 20 мкг/мл канамицин агуулсан LA орчинд наасан байна. 37°С-т 12 цагийн турш өсгөвөрлөсний дараа клонуудыг хогийн ургамлаас гаргаж, плазмидын ДНХ-ийг тусгаарлаж, хязгаарлалтын шинжилгээ хийнэ. Үүний үр дүнд 2641 bp pSX3 плазмидыг олж авдаг.

pSX10 вектор плазмидыг авахын тулд ПГУ-аар ДНХ-ийн олшруулалтын гурван үе шатыг хийсэн. Эхний шатанд pSX3 плазмидын ДНХ-ийг загвар болгон ашиглан 2025 bp ДНХ-ийн фрагментийг олшруулах ажлыг гүйцэтгэдэг. (фрагмент 10.1-10.2) праймер ашиглан:

Хоёр дахь шатанд pKK223-3 плазмидын ДНХ-ийг загвар болгон ашиглан 528 bp ДНХ-ийн фрагментийг олшруулах ажлыг гүйцэтгэдэг. (Фрагмент KK1-KK2) праймер ашиглан:

ПГУ-ын гурав дахь шатанд фрагментуудыг (10.1-10.2) ба (KK1-KK2) дараах нөхцлөөр нэгтгэнэ: 95 ° C-т 5 минут халаах, 5 ПГУ-ын цикл (30 сек 95 ° C, 30 сек 56 ° C) , 10 мин 72°С) ба 72°С-т 10 минутын турш өсгөвөрлөнө. Сүүлчийн ПГУ-ын дараа олж авсан ДНХ нь E. coli DH5 эс болон хувирч, 20 мкг/мл канамицин агуулсан LA орчинд наасан байна. 37°С-т 12 цагийн турш өсгөвөрлөсний дараа клонуудыг хогийн ургамлаас гаргаж, плазмидын ДНХ-ийг тусгаарлаж, хязгаарлалтын шинжилгээ хийнэ. Үр дүн нь 2553 bp pSX10 плазмид юм.

pSX41 рекомбинант плазмидыг бүтээх

pSX41 рекомбинант плазмид нь pSX3 вектор плазмидын Hind III - BamHI ДНХ фрагмент (2529 bp), Hind III - E. coli триптофан опероны дэмжигчийг (P trp), EcoRI-XbaI a20 кодчилдог 168 bp-ийн EcoRI ДНХ-ийн фрагмент юм. SD дарааллыг кодлодог синтетик ДНХ-ийн фрагмент (Шинэ-Делгарно) ба хүний ​​интерферон альфа 2b генийг кодлодог 501 bp XbaI-BamHI ДНХ-ийн фрагмент.

pSX3 вектор плазмидын Hind III - VamHI ДНХ-ийн фрагментийг (2529 bp) авахын тулд pSX3 плазмидын ДНХ-ийг HindIII ба BamHI хязгаарлах ферментээр эмчилж, дараа нь 1% агароз гель дэх электрофорезийн аргаар цэвэршүүлнэ. Триптофан опероны (P trp) дэмжигчийг кодлодог 168 bp хүчин чадалтай Hind III EcoRI ДНХ-ийн фрагментийг нийт E. coli ДНХ-ийг загвар болгон, TRP1 болон PRP2 праймеруудыг ашиглан ПГУ-аар олж, дараа нь олшруулсан фрагментийг Hindlll болон EcoRI хязгаарлалтаар боловсруулав. ферментүүд:

SD дарааллыг (Shine-Delgarno) кодлодог 20 бит-ийн синтетик ДНХ-ийн фрагмент болох EcoRI-Xbal-ийг авахын тулд дараах нэмэлт олигонуклеотидуудыг нэгтгэдэг.

Хүний интерферон альфа 2b генийг кодлодог 501 bp XbaI-BamIII ДНХ-ийн фрагментийг хүний ​​нийт ДНХ-ийг загвар болон IFN1 ба IFN2 праймер болгон ашиглан ПГУ-аар гаргаж аваад дараа нь олшруулсан фрагментийг Xbal болон BamIII хязгаарлах ферментүүдээр боловсруулдаг.

Дараа нь электрофорезийн аргаар цэвэршүүлсэн хэсгүүдийг нэгтгэж, T4 фагийн лигазын ферменттэй холбож, ДНХ-ийг E. coli DH5 эс болгон хувиргаж, 20 мкг/мл канамицин агуулсан LA орчинд наана. 37°С-т 12 цагийн турш өсгөвөрлөсний дараа клонуудыг хогийн ургамлаас гаргаж, плазмидын ДНХ-ийг ялгаж, хязгаарлалтын шинжилгээ хийж, ДНХ-ийн анхдагч бүтцийг тодорхойлно. Үр дүн нь 3218 bp pSX41 плазмид юм. Дараа нь зорилтот бүтээгдэхүүний илэрхийлэлийн түвшинг нэмэгдүүлэхийн тулд интерфероны генийн мутагенезийг үе шаттайгаар явуулдаг. Интерфероны генийн мутагенез нь E. coli-д ховор олддог гурвалсан үрийг харгалзах амин хүчлүүдийг кодчилдог, харин E. coli-д байнга олддог гурвалсан үрийг ижил амин хүчлүүдийг кодчилдог. Интерферон генийн ДНХ-ийн мутагенезийг ПГУ-аар гүйцэтгэдэг.

pSX43 рекомбинант плазмидыг бүтээх

pSX43 рекомбинант плазмидыг авахын тулд нэг удаагийн ДНХ олшруулалтыг ПГУ-аар pSX41 плазмидын ДНХ болон IFN3 ба IFN4 праймеруудыг загвар болгон ашиглан гүйцэтгэдэг.

ПГУ-ыг дараах нөхцөлд явуулна: 95°С-т 5 минут халаана, 20 ПГУ-ын цикл (30 сек 95°С, 30 сек 56°C, 10 мин 72°C), 72°С-т 20 минутын турш инкубаци хийнэ. ПГУ-ын дараа олж авсан ДНХ нь E. coli DH5 эс болон хувирч, 20 мкг/мл канамицин агуулсан LA орчинд наасан байна. 37°С-т 12 цагийн турш өсгөвөрлөсний дараа клонуудыг хогийн ургамлаас гаргаж, плазмидын ДНХ-ийг ялгаж, хязгаарлалтын шинжилгээ хийж, ДНХ-ийн анхдагч бүтцийг тодорхойлно. Үүний үр дүнд 3218 bp pSX43 плазмидыг олж авдаг.

pSX45 рекомбинант плазмидыг бүтээх

pSX45 рекомбинант плазмидыг авахын тулд нэг удаагийн ДНХ-ийн олшруулалтыг ПГУ-аар pSX43 плазмидын ДНХ болон IFN5 ба IFN6 праймеруудыг ашиглан хийнэ.

ПГУ-ыг дараах нөхцөлд явуулна: 95°С-т 5 минут халаана, 20 ПГУ-ын цикл (30 сек 95°С, 30 сек 56°C, 10 мин 72°C), 72°С-т 20 минутын турш инкубаци хийнэ. ПГУ-ын дараа олж авсан ДНХ нь E. coli DH5 эс болон хувирч, 20 мкг/мл канамицин агуулсан LA орчинд наасан байна. 37°С-т 12 цагийн турш өсгөвөрлөсний дараа клонуудыг хогийн ургамлаас гаргаж, плазмидын ДНХ-ийг ялгаж, хязгаарлалтын шинжилгээ хийж, ДНХ-ийн анхдагч бүтцийг тодорхойлно. Үр дүн нь 3218 bp pSX45 плазмид юм.

pSX50 рекомбинант плазмидын бүтээн байгуулалт.

pSX50 рекомбинант плазмидыг авахын тулд нэг удаагийн ДНХ-ийн олшруулалтыг ПГУ-аар pSX45 плазмидын ДНХ болон IFN7 ба IFN8 праймеруудыг ашиглан хийнэ.

ПГУ-ыг дараах нөхцөлд явуулна: 95°С-т 5 минут халаана, 20 ПГУ-ын цикл (30 сек 95°С, 30 сек 56°C, 10 мин 72°C), 72°С-т 20 минутын турш инкубаци хийнэ. ПГУ-ын дараа олж авсан ДНХ нь E. coli DH5 эс болон хувирч, 20 мкг/мл канамицин агуулсан LA орчинд наасан байна. 37°С-т 12 цагийн турш өсгөвөрлөсний дараа клонуудыг хогийн ургамлаас гаргаж, плазмидын ДНХ-ийг ялгаж, хязгаарлалтын шинжилгээ хийж, ДНХ-ийн анхдагч бүтцийг тодорхойлно. Үр дүн нь 3218 bp pSX50 плазмид юм.

Жишээ 2. Интерферон үйлдвэрлэгч E. coli SX50 омгийг олж авах.

E. coli SX50 интерферон үүсгэгч омог нь E. coli BL21 омгийн эсийг рекомбинант pSX50 плазмидтай хувиргах замаар гаргаж авдаг. Интерферон үүсгэгч омог нь 30 литрийн багтаамжтай исгэх саванд 25.0-30.0 o.u оптик нягтрал хүртэл ургадаг. казеины 1% хүчил гидролизат (Difco), 1% глюкоз, 40 мкг/мл канамицин агуулсан M9 орчинд 38-39°C температурт. Исгэлтийн явцад шим тэжээлийн субстратын тасралтгүй нэмэлтийг гравиметрийн хянагч ашиглан гүйцэтгэдэг.

Жишээ 3 E. coli SX50 омогоос интерфероныг тусгаарлах арга

Интерфероныг 4 үе шаттайгаар авдаг.

1-р шат. E. coli SX50 омгийн тариалалт.

2-р шат. Интерфероны уусдаггүй хэлбэрийг тусгаарлах, цэвэршүүлэх.

3-р шат. Интерфероныг уусгах, нөхөн сэргээх.

4-р шат. Интерфероны хроматографийн цэвэршилт.

1-р шат. E. coli SX50 омгийн тариалалт

E. coli SX50 омгийн ургуулсан тарилгыг 3 литр баялаг LB орчинд 260С-т 12 цагийн турш M9, 1% казеины хүчлийн гидролизат, 1 агуулсан 27 литр ариутгасан орчин бүхий исгэх саванд асептик байдлаар оруулна. % глюкоз, 1 мм MgCl 2, 0.1 мМ CaCl 2, 40 мг/мл канамицин. Исгэгчд тариалахдаа 38-39°С-ийн температурт рН-ийг 7±0.15 хэмд байлгаж, 40%-ийн натрийн гидроксидын уусмалаар автомат титрлэнэ. Хутгуурын хурдыг 100-аас 800 эрг/мин, агаарын хангамжийг 1-ээс 15 л/мин болгон өөрчлөх замаар ханасан (50±10)%-ийн хүрээн дэх ууссан хүчилтөрөгчийн концентрацийг хадгална. Исгэх явцад субстратын концентраци, ялангуяа глюкоз ба мөөгөнцрийн хандыг хэмжиж, гравиметрийн хянагч ашиглан перисталтик шахуургаар дамжуулан төвлөрсөн уусмалын тэжээлийн хурдыг өөрчлөх замаар тэдгээрийн концентрацийг хадгална.

Уусдаггүй хэлбэрийн интерфероны хуримтлалыг фазын тодосгогч микроскоп, 15% полиакриламид гель (SDS-PAAG) дахь электрофорез, урвуу фазын өндөр үзүүлэлттэй хроматографи (RF HPLC) ашиглан хянадаг. Хамгийн их оптик нягтралд (~ 25-30 p.u.) хүрч, интерфероны нийлэгжилтийг зогсоосны дараа исгэх нь зогсдог. Исгэлтийн төгсгөлд өсгөвөрлөх шингэнийг 5000-10000 эрг / мин эргэлтийн хурдтайгаар урсгалын роторт центрифуг хийх замаар ялгана. Биомассыг гялгар уутанд хийж, хасах 70 хэмд хөлдөөдөг.

2-р шат. Интерфероны уусдаггүй хэлбэрийг тусгаарлах, цэвэршүүлэх

E. coli SX50-ийн 300-400 г хөлдөөсөн биомассыг 3000 мл буфер 1-д (20 мМ Tris-HCl, рН 8.0, 10 мм EDTA, 0.1% Triton X100) түдгэлзүүлнэ. Түдгэлзүүлэлтийг Гаулин төрлийн урсгалын нэгэн төрлийн тохируулагчаар дамжуулж, 900 бар-д байлгаж, урсгалын роторт 15,000 эрг / мин-д центрифуг хийнэ. Олж авсан тунадасыг 2-р буфер (20мМ Tris-HCl, рН 8.0, 1мМ EDTA, 3М мочевин) ба буфер 3 (20мМ Tris-HCl рН 8.0, 1мМ EDTA) ба эцэст нь интерфероноор ижил төстэй нөхцөлд дараалан угаана. тунадасыг 200 мл буферт түдгэлзүүлсэн байна 3. Интерфероны уусдаггүй хэлбэрийг тусгаарлах, цэвэршүүлэх хугацаа 5 цагаас илүүгүй байна.

3-р шат. Интерфероныг уусгах, нөхөн сэргээх

Хуурай гуанидин гидрохлоридыг өмнөх үе шатанд олж авсан уусдаггүй хэлбэрийн интерфероны суспензэнд 6 М, дитиотреитолыг 50 мм, Tris-HCl рН 8.0, 50 мм, NaCl -ийг нэмнэ. 150 мм-ийн концентраци ба Triton X100-ийг 0.1% -ийн концентраци хүртэл тасалгааны температурт 2 цагийн турш өсгөвөрлөнө.Уусаагүй материалыг 0.22 микрон нүхний диаметр бүхий мембранаар ариутгах шүүлтүүрээр тусгаарлана.

Интерфероны нөхөн төлжилтийг үүссэн уусмалыг 4-р буфер (20 мМ Tris-HCl рН 8.0, 100 мМ NaCl, 0.1 мм EDTA) -аар 100-200 удаа аажмаар шингэлэх замаар гүйцэтгэдэг. Үүний дараа нөхөн сэргээх хольцыг 4-8 хэмийн температурт 12-15 цагийн турш тогтмол хутгах замаар өсгөвөрлөнө. Дараа нь магнийн сульфатыг 1 мм-ийн концентрацид нэмж, нэгтгэсэн материалыг 0.22 микрон нүхний диаметр бүхий мембран шүүлтүүрээр ариутгах замаар зайлуулна.

4-р шат. Интерфероны хроматографийн цэвэршилт

Интерфероныг хроматографийн аргаар цэвэршүүлэх ажлыг гурван үе шаттайгаар явуулдаг.

1. Үүссэн шинэчлэгдсэн интерфероныг эхлээд Cu +2 ионоор хөдөлгөөнгүй болгосон Chelating Sepharose Fast Flow давирхай (Amersham Biosciences) дээр ойртох хроматографийн аргаар цэвэршүүлнэ. Үүнийг хийхийн тулд интерфероны уусмалыг Cu +2 Chelating Sepharose Fast Flow бүхий баганад түрхэж, интерфероныг 0.1 М буферээр шүүнэ. нимбэгийн хүчилрН 2.2.

2. Хроматографийн цэвэршүүлэх хоёр дахь шатанд интерфероны уусмалыг CM Sepharose Fast Flow катион солилцооны давирхайд (Amersham Biosciences) түрхэж, интерфероныг уусмалын градиентээр (0.0-0.5 M NaCl) 50 мМ Na-д шингэлнэ. (CH 3 COO) буфер, рН 5.5.

3. Интерфероны полимер хэлбэрийн үлдэгдэлээс мономер хэлбэрийн интерфероныг цэвэршүүлэх ажлыг Superdex 75 төрлийн давирхай (Amersham Biosciences) дээр гель шүүж интерфероныг цэвэршүүлэх 3-р шатанд явуулдаг. Хроматографийг 50 мМ Na(CH 3 COO) буферт, рН 5.0, 0.15 М NaCl агуулсан дотор хийнэ.

Интерфероныг тусгаарлах, цэвэршүүлэх тайлбарласан арга нь 10 л өсгөвөрлөгчөөс гаргаж авсан биомассаас 4-8 г өндөр цэвэршүүлсэн интерфероныг 7-10 хоногийн турш тусгаарлах циклээр авах боломжтой болгодог. Үүссэн интерфероны чанар нь интерферон альфа-2b бодисын "Европын фармакопей"-ийн шаардлагад бүрэн нийцдэг, тухайлбал:

Интерфероны концентраци 2 × 10 8 IU / мл-ээс багагүй байна;

Интерфероны өвөрмөц үйл ажиллагаа нь 2.0 × 10 8 IU / мг-аас багагүй байна;

Гельийг мөнгөөр ​​будах үед эмийн электрофоретик цэвэршилт нь бууруулж, бууруулаагүй нөхцөлд 99% -иас багагүй байна;

Тусгаарлагдсан интерфероны изоэлектрик цэг нь рН 5.8-6.3 бүсэд байна;

Тусгаарлагдсан интерфероны пептидийн зураг нь интерферон альфа 2b CRS-ийн Европын стандартын пептидийн зураглалаас үндсэндээ ялгаатай биш юм;

Дээрх жишээнүүдээс үзэхэд тунхагласан шинэ бүтээлийн бүлэг нь харьцангуй энгийн бөгөөд найдвартай технологиор өндөр гарцтай интерферон альфа-2б-ийг авах боломжтой болгодог.

Нэхэмжлэх

1. Хүний рекомбинант альфа-2b интерфероны нийлэгжилтийг кодлодог рекомбинант плазмидын ДНХ pSX50 нь 3218 суурь хос (bp) хэмжээтэй бөгөөд дараах хэсгүүдээс бүрддэгээрээ онцлог юм: 1-ээс 176 нуклеотид (n) хүртэлх дараалалд a. фрагмент 176 bp триптофан дэмжигч (P trp) агуулсан ДНХ, дараалал 177-194 bp. орчуулгын эхлэлийг хариуцдаг Shine Delgarno дарааллыг агуулсан 18 bp-ийн синтетик ДНХ-ийн фрагмент, 195-аас 695 bp хүртэлх дарааллыг агуулдаг. Үүнд нуклеотидын орлуулалт бүхий интерферон альфа-2b генийг агуулсан 501 bp ДНХ-ийн фрагмент орно: 37 (A>C), 39 (G>T), 40 (A>C), 42 (G>T), 67 ( A>C ), 69 (G>T), 70 (A>C), 72 (A>T), 96 (G>A), 100 (A>C), 102 (A>T), 114 (A >C) , 120 (C>G), 126 (G>A), 129 (G>A), 330 (C>G), 339 (G>A), 342 (G>A), 487 (A> C), 489 (A>T), 495 (G>A), дараалал 696-аас 713 b.p. 714-1138 bp-ийн дараалал бүхий синтетик полилинкер агуулсан 18 bp-ийн синтетик ДНХ-ийн фрагмент орно. pKK223-3 плазмидын ДНХ-ийн фрагмент нь 4129-аас 4553 b.p. 425 bp хэмжээтэй, хатуу транскрипцийн төгсгөлийн rrnBT 1 T 2 дарааллыг агуулсан, 1139-аас 1229 b.p хүртэлх дарааллыг агуулсан. 2487-аас 2577 b.p хүртэлх pUC19 плазмидын ДНХ-ийн фрагмент багтана. 91 bp хэмжээтэй, β-лактомазын генийг дэмжигч (ампициллиний эсэргүүцлийн ген -Amp R) агуулсан, 1230-аас 2045 b.p хүртэлх дараалал. 720 b.p-тэй pUC4K плазмидын ДНХ-ийн фрагмент багтана. МЭ 1535 он хүртэл 816 bp хэмжээтэй, кан генийн бүтцийн бүсийг агуулсан, 2046 b.p.-ийн дараалал. МЭ 3218 он хүртэл 1625-аас 453 b.p хүртэл pUC19 плазмидын ДНХ-ийн фрагмент багтана. хэмжээ 1173 BP, плазмид (ори) ба лак промотор (P lac) -ийн хуулбарыг хариуцдаг дарааллыг агуулсан.

2. Нэхэмжлэлийн 1-д заасны дагуу рекомбинант плазмидтай хувирсан Eschcerichia coli SX50 бактерийн омог нь хүний ​​рекомбинант лейкоцитын интерферон альфа-2b үйлдвэрлэгч юм.

3. 700-900 бар даралтын үед биосинтезийн явцад шим тэжээлийн субстратыг тогтмол нэмсэн шим тэжээлт орчинд бичил биетний эсийг механикаар устгах, 2-р зүйлийн дагуу Escherichia coli SX5 омгийг тариалах зэрэг хүний ​​альфа-2b интерфероныг үйлдвэрлэх арга. , интерфероныг гуанидины гидрохлоридын буфер уусмалд уусгах, эмх замбараагүй байдлын нөлөөгөөр интерфероныг физиологийн буферийн уусмалд нөхөн сэргээх, интерфероныг гурван үе шаттайгаар хроматографийн аргаар цэвэршүүлэх, тухайлбал Chelating Sepharose Fast Flow зэрэг давирхайн дээр Cu+2 солилцооны хроматографи ашиглан хөдөлгөөнгүй болгох. CM Sepharose Fast Flow зэрэг ион солилцооны давирхайн дээр, Superdex 75 зэрэг давирхайн дээр хэмжээ хасах хроматографи.

4. 3-р зүйлийн дагуу тариалалт нь шим тэжээлийн субстрат, болж өгвөл глюкоз, мөөгөнцрийн хандыг тасралтгүй нэмсэн триптофаны агууламж багатай тэжээллэг орчинд хийгдэх арга.

5. Интерфероныг уусгахаасаа өмнө ДНХ, РНХ, уураг, липополисахарид зэрэг уусдаг эсийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг зайлуулж, Triton XI 00, мочевин зэрэг угаалгын нунтаг агуулсан буферийн уусмалаар угааж цэвэршүүлдэг арга.

6. Хроматографийн цэвэршүүлэлт бүрийн дараа 0.22 мкм нүх сүвний хэмжээтэй шүүлтүүрээр ариутгах шүүлт хийх 3 дугаар зүйлийн дагуу арга.

Эмийн найрлагад багтсан

VED

ONLS

L.03.A.B.05 Интерферон альфа-2b

I.B15-B19.B16 Цочмог гепатит В

I.B15-B19.B18.1 Дельта үүсгэгчгүй архаг вируст гепатит В

I.B15-B19.B18.2 Архаг вируст гепатит С

I.B20-B24.B21.0 Капошигийн саркомын илрэл бүхий ХДХВ-ийн халдвар

II.C43-C44.C43 Арьсны хортой мелонома

II.C64-C68.C64 хорт хавдарбөөрний аарцагнаас бусад бөөр

II.C81-C96.C84 Захын болон арьсны Т эсийн лимфома

II.C81-C96.C84.0 Мөөгөнцрийн микоз

II.C81-C96.C84.1 Цезаригийн өвчин

II.C81-C96.C91.4 Үсэрхэг эсийн лейкеми (лейкемийн ретикулоэндотелиоз)

II.C81-C96.C92.1 Архаг миелоид лейкеми

Д нөхөн олговоргүй элэгний хатуурал;

P сэтгэцийн эмгэг;

-интерферон альфа-2-д хэт мэдрэг байдалб;

- хүнд зүрх судасны өвчин;

Т Би сэтгэлийн хямралыг хүсч байна;

БА архи, мансууруулах бодисын донтолт;

- аутоиммун өвчин;

-тухайцочмог миокардийн шигдээс;

- гематопоэтик тогтолцооны хүнд хэлбэрийн эмгэг;

-эпилепси ба / эсвэл төв мэдрэлийн тогтолцооны бусад эмгэг;

-Дархлаа дарангуйлах эмчилгээ хийлгэж байгаа эсвэл авахын өмнөхөн өвчтөнд архаг гепатит (стероидтой богино хугацааны өмнөх эмчилгээг эс тооцвол).

Дата байхгүй.

Альтевир (Алтевир), Альфарона (Альфарона), Виферон (Виферон), Интрон-А (Интрон-А), Реалдирон (Реалдирон), Эберон альфа R (Эберон альфа R).

Бүтэц ба хувилбарын хэлбэр

Интерферон альфа-2b. Тарилгын лиофилжсэн нунтаг (1 хуруу шилэнд - 3 сая IU, 5 сая IU, 10 сая IU, 30 сая IU). Рекомбинант интерферон альфа-2b.

Тарилгын уусмал (үзэг тариур - 10 сая IU, 18 сая IU, 25 сая IU; 1 хуруу шилэнд - 10 сая IU, 18 сая IU, 25 сая IU; 1 тун - 3 сая IU, 5 сая IU, 10 сая IU) ). Хүний рекомбинант интерферон альфа-2b. Шулуун гэдэсний лаа (150,000 ME, 500,000 ME).

фармакологийн нөлөө

Мансууруулах бодис нь парентераль эмчилгээнд зориулагдсан өндөр цэвэршүүлсэн рекомбинант интерферон альфа-2b юм. Интерфероны синтезийг кодлодог хүний ​​лейкоцитын гентэй бактерийн плазмидыг эрлийзжүүлэх замаар гэдэсний савханцарын клоноос гаргаж авсан. Энэ нь 19300 дальтон молекул жинтэй усанд уусдаг уураг юм.

Интерферонуудын биологийн идэвхжил нь тэдгээрийг эсийн тусгай мембран рецепторуудтай холбох замаар илэрдэг. Интерферон альфа-2b нь хавдрын эсүүдэд пролифератив нөлөө үзүүлэхээс гадна вирусын эсрэг болон дархлаа дарангуйлах нөлөөтэй.

Фармакокинетик

С / с ба / м-ийн хэрэглээтэй бол биологийн хүртээмж 100% байна. - судсаар тарих үед 2-3 цаг, булчинд тарих үед - 6-7 цаг, судсаар - 2 цаг. Цусны сийвэн дэх интерфероны концентрацийг 16.24 ба 4 цагийн дараа тус тус тогтоогоогүй. Альфа интерферонууд нь исэлдэлтийн бодисын солилцооны процессыг тасалдуулж, цитохромын P450 системийн элэгний микросомын ферментийн идэвхийг бууруулдаг. Шээсээр ялгардаг.

Үзүүлэлтүүд

Олон миелома (ерөнхий хэлбэрүүд), үсэрхэг эсийн лейкеми, архаг миелоген лейкеми, хорт хавдар, хорт хавдар Давсаг, өнгөц байрлалтай бэлгийн замын кондиломатоз, ларингопапиломатоз, Капоши саркома, ДОХ, архаг гепатит С, архаг гепатит В.

Өргөдөл

Хэрэглэх ба эмчилгээний горим нь өвчний төрлөөс хамаарна. Жирэмсэн үед интерферон альфа-2b-ийг зөвхөн эхэд үзүүлэх эмчилгээний үр нөлөө нь урагт үзүүлэх болзошгүй эрсдлээс давсан тохиолдолд л хэрэглэнэ.

Эмийн бүрэлдэхүүн хэсгүүд нь GRM-д нэвтэрдэг. Тиймээс хөхүүл үед эхэд интерферон альфа-2b хэрэглэх нь чухал болохыг үндэслэн аль нэгийг нь зогсооно. хөхөөр хооллохэсвэл эмийн эмчилгээ. Хүүхдэд мансууруулах бодис хэрэглэх туршлага бага байдаг: хүүхдэд эмийг томилохдоо сайтар үндэслэлтэй байх ёстой.

Гаж нөлөө

Төв мэдрэлийн систем, сэтгэл зүйд: ихэвчлэн - ядрах мэдрэмж, толгой өвдөх; ухамсрын хямрал, толгой эргэх, атакси, түгшүүр, сэтгэлийн хямрал, цочромтгой байдал, нойрмоглох, парестези үүсэх боломжтой; ховор тохиолддог - нойргүйдэл; Нүдний моторын мэдрэлийн саажилт, харааны бэрхшээлийг хөгжүүлэх тусгаарлагдсан тохиолдлыг тайлбарласан болно.

CCC дээр: цусны даралт ихсэх эсвэл гипотензи боломжтой; ховор тохиолддог - тахикарди; ортостатик гипотензи үүсэх, амьсгал давчдах зэрэг тохиолдлуудыг тодорхойлсон.

Жич дээр: ихэвчлэн - хоолны дуршилгүй болох, дотор муухайрах, ACT ба ALT-ийн түвшин нэмэгдсэн (эмийн тунг өдөрт 100 сая IU-аас их хэмжээгээр хэрэглэх үед), шүлтлэг фосфатаз; бөөлжих боломжтой; ховор тохиолддог - өтгөн хатах, стоматит; диспепси, шүлс ихсэх, шархлаат стоматит, хий үүсэх зэрэг тохиолдлуудыг тодорхойлсон.

Их Британид: ихэвчлэн - тромбоцитопени, гранулоцитопени; зарим тохиолдолд - цусны бүлэгнэлтийн эмгэг (протромбин ба хэсэгчилсэн тромбопластины хугацаа нэмэгдэх), хамрын цус алдалт; пурпура үүсэх тусдаа тохиолдлуудыг тайлбарласан болно.

Арьс дээр: халцрах, түр зуурын тууралт, загатнах; ховор тохиолддог - чонон хөрвөс, фурункулоз, герпетик дэлбэрэлт, цэврүүт хаг; улайлт үүсэх тусгаарлагдсан тохиолдлыг тайлбарласан болно.

Орон нутгийн хариу урвал: тарилгын талбайд үрэвслийн тусгаарлагдсан тохиолдлыг тайлбарласан болно.

Бусад: ихэвчлэн - халуурах, миалги; артралги үүсэх боломжтой; ховор тохиолддог - тугалын булчингийн агшилт, дулааны пароксизм мэдрэмж, шингэн алдалт, ханиалгах, креатинины агууламж нэмэгдэх; найтаах, хамраас шүүрлийн гадагшлах урсгалыг зөрчих, гипергликемийн тусгаарлагдсан тохиолдлыг тодорхойлсон.